COPD患者血清和SB203580对LPS刺激小鼠肺泡巨噬细胞分泌RANTES、IL-10的影响

发布时间：2017-05-14 03:01

  本文关键词：COPD患者血清和SB203580对LPS刺激小鼠肺泡巨噬细胞分泌RANTES、IL-10的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）是一种慢性气道炎症性疾病，以气流受限、反复咳嗽、咳痰、气促和呼吸困难为主要特征，且其气流受限不完全可逆并呈进行性发展，其发病过程中活化的炎症细胞释放多种介质，是由于感染、免疫、中毒等因素引起肺部和各级支气管内炎性细胞的浸润，包括巨噬细胞和中性粒细胞等，这些炎性细胞均能够释放炎症介质导致瀑布级联，从而促使肺部炎性介质和抗炎介质失衡引发肺部疾病。脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）能够刺激机体中性粒细胞、巨噬细胞等释放大量炎性介质，从而促进COPD等炎症性肺病（inflammatory lung disease, ILD）的发生。肺泡巨噬细胞（alveolar macrophages，AMs）是LPS引起COPD等ILD发生主要效应细胞，是肺第一道防线，它能够释放多种炎症因子从而使炎性介质、抗炎介质失衡诱发肺部炎症。抑制丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信号转导通路可以减少促炎因子的释放。参与其中的这些细胞因子可能成为COPD治疗的新靶点。在本实验中我们以小鼠肺泡巨噬细胞株（MH-S）为研究对象，观察COPD患者血清与p38MAPK抑制剂SB203580对LPS诱导上述细胞分泌RANTES和IL-10的影响，并进一步探讨RANTES的表达，为将p38MAPK抑制剂应用于临床治疗COPD提供了新的理论基础。 方法：1用ELISA法检测细胞上清液中RANTES浓度。常规培养MH-S细胞株，调整细胞浓度至5×10~6/ml，将细胞置于24孔板中培养并过夜，随机分组：①对照组：分别以1%、5%、10%健康人及COPD患者血清+RPMI1640及10%小牛血清+RPMI1640作为培养液孵育MH-S细胞；②LPS组：分别以1%、5%、10%健康人及COPD患者血清+RPMI1640及10%小牛血清+RPMI1640作为培养液孵育MH-S细胞6h后，应用LPS刺激，调整终浓度为100ng/ml;③LPS+SB组：分别以1%、5%、10%健康人及COPD患者血清+RPMI1640及10%小牛血清+RPMI1640作为培养液孵育MH-S细胞6h后，加入SB203580和LPS进行刺激，调整SB203580和LPS的终浓度分别为10μmol/L和100ng/ml，并使SB203580提前孵育20min后再加入LPS刺激。各组分别刺激6h，收集细胞上清液，冻存于-80℃冰箱，待ELISA法检测RANTES浓度。 2用ELISA法检测细胞上清液中的IL-10浓度，方法和分组与RANTES测定相同。 3免疫细胞化学法测定RANTES的表达变化。调整细胞浓度1×10~6/ml，于24孔板爬片过夜，仍按以上分组对MH-S细胞刺激后，用免疫细胞化学法检测各组细胞中RANTES的表达变化。 结果：1细胞上清液中的RANTES含量变化：①LPS刺激MH-S细胞，细胞上清液中RANTES含量增加，且随血清浓度增高而增加，且用COPD患者血清孵育的细胞上清液中RANTES含量高于健康人。与相同类型血清同一浓度对照组相比较其差异具有统计学意义（P＜0.05）。用p38MAPK抑制剂SB203580+LPS干预后，RANTES含量减少，但仍高于对照组，与相同类型血清同一浓度对照组相比较其差异具有统计学意义（P＜0.05）。相同类型血清同一浓度LPS组与LPS+SB203580组比较（P＜0.05）也有统计学意义。②随着COPD患者血清浓度增高，RANTES含量在control组、LPS组和LPS+SB组均呈高度正相关（r=0.966,P＜0.01;r=0.974, P＜0.01; r=0.945, P＜0.01）；随着健康人血清浓度增高，RANTES含量在control组、LPS组和LPS+SB组亦呈高度正相关（r=0.968,P＜0.01;r=0.979, P＜0.01; r=0.965, P＜0.01）。③COPD患者血清和LPS共同作用MH-S细胞可发挥协同作用，，进一步诱导RANTES增加，与同一血清浓度健康对照组相比较（P＜0.05）差异有统计学意义。 2细胞上清液中的IL-10含量变化：①LPS刺激MH-S细胞，细胞上清液中IL-10含量增加，且随血清浓度增高而增加，但用COPD患者血清孵育的细胞上清液中IL-10含量低于健康人。与相同类型血清同一浓度对照组相比较（P＜0.05）其差异具有统计学意义。用p38MAPK抑制剂SB203580+LPS干预后，IL-10含量减少，但仍高于对照组。与相同类型血清同一浓度对照组相比较其差异有统计学意义（P＜0.05）。相同类型血清同一浓度LPS组与LPS+SB203580组比较（P＜0.05）也有统计学意义。②随着COPD患者血清浓度增高，IL-10含量在control组、LPS组和LPS+SB组均呈显著正相关（r=0.920,P＜0.01; r=0.923, P＜0.01; r=0.765, P＜0.01）；随着健康人血清浓度增高，IL-10含量在control组、LPS组和LPS+SB组亦呈高度正相关（r=0.983,P＜0.01; r=0.878, P＜0.01; r=0.985, P＜0.01）。③COPD患者血清与LPS对诱导IL-10分泌协同作用不明显。 3免疫细胞化学测定RANTES的表达：对照组细胞质仅有微弱黄染；LPS刺激细胞后胞浆黄染增强；用SB203580预处理后，LPS刺激引起的胞浆黄染减弱但仍强于对照组；随着血清浓度增高胞浆黄染增强且COPD患者较健康人及小牛血清者黄染显著，各组与对照组比较均有统计学意义（P＜0.05）。LPS组与LPS+SB203580组比较（P＜0.05）也有统计学意义。 结论：1LPS可引起MH-S细胞上清液中的RANTES及IL-10分泌增加，用SB203580干预后，RANTES、IL-10分泌减少，但仍高于对照组，提示SB203580可能部分抑制RANTES及IL-10分泌。 2同一COPD患者随着血清浓度的增加RANTES及IL-10含量均呈增高趋势，均具有相关性，且RANTES含量高于健康人，IL-10含量低于健康人。提示COPD患者血清本身对MH-S细胞可能就是一种炎性刺激，且其对于RANTES分泌与LPS有协同作用。 3无活性RANTES存在于胞浆。LPS刺激MH-S细胞后，RANTES被激活变为有活性的RANTES，胞浆显著黄染。应用SB203580干预后，胞浆黄染减弱，提示SB203580可通过p38MAPK减少其表达。
【关键词】：慢性阻塞性肺疾病 p38MAPK抑制剂 小鼠肺泡巨噬细胞 信号转导及转录活化子-3 RANTES 白介素-10 脂多糖
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R563.9
【目录】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-12
• 前言12
• 材料与方法12-18
• 结果18-20
• 附图20-27
• 附表27-28
• 讨论28-31
• 结论31-32
• 参考文献32-34
• 综述 RANTES 和 IL-10 与慢性阻塞性肺疾病的关系34-41
• 参考文献38-41
• 致谢41-42
• 个人简历42

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 张国祥;许文龙;;T淋巴细胞及其分泌的细胞因子与哮喘[J];蚌埠医学院学报;2008年01期

2 张建全;钟小宁;柳广南;李超乾;;白细胞介素-10在慢性阻塞性肺疾病中作用探讨[J];广西医科大学学报;2008年01期

3 陈延伟;杨炯;张济祥;彭娟;余红樱;;稳定期慢性阻塞性肺疾病外周血IL-8、IL-10与吸烟量的关系[J];武汉大学学报(医学版);2007年06期

4 水华;丁国华;;p38信号通路对单侧输尿管结扎大鼠RANTES的影响[J];中华急诊医学杂志;2006年08期

5 王晓青;;慢性阻塞性肺疾病患者血清IL-8、IL-10、α-HBDH、CRP及NO水平的变化[J];细胞与分子免疫学杂志;2010年12期

6 曹岩;黄颖;钟莉莉;杨春荣;李方莲;;老年支气管哮喘患者血清中白细胞介素及肿瘤坏死因子的检测及意义[J];中国实验诊断学;2009年02期

  本文关键词：COPD患者血清和SB203580对LPS刺激小鼠肺泡巨噬细胞分泌RANTES、IL-10的影响，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：364116