军团菌感染致免疫抑制豚鼠肺循环变化及肠道细菌易位的实验研究

发布时间：2022-07-13 13:26

　　目的:军团菌肺炎是社区环境中常见的三种重症肺炎之一,发病率2-9%,病死率10%,血清1型嗜肺军团菌（Lp）对人类最有致病力,占军团菌感染的84%。免疫抑制状态是军团菌感染的重要危险因素,而且免疫抑制宿主相较正常免疫力宿主更易感染Lp,更易发展成重症肺炎,病死率可达20-70%。重症肺炎特征性病理生理改变为肺毛细血管通透性增加、肺水肿。目前免疫抑制宿主感染Lp多为临床个案报道,缺乏与正常免疫力宿主感染Lp间病情严重程度差异的机制研究,同时,军团菌肺炎患者易出现多器官系统损伤,如肝功能异常、腹泻等等,多为临床个案报道,尚无相关基础研究。本研究建立免疫抑制合并Lp感染豚鼠模型,研究其平均肺动脉压变化、肺毛细血管通透性改变程度、肠道菌群失衡、肠道细菌易位及其导致的肝脏损伤等,以期解答部分临床问题。研究方法:本研究分二部分,第一部分研究免疫抑制合并Lp感染豚鼠肺毛细血管通透性改变机制及平均肺动脉在肺水肿形成过程中的作用。实验动物分为四组:对照组,Lp感染组,免疫抑制组及免疫抑制合并Lp感染组,三个实验时间点Lp感染24h、48h和72h。免疫抑制豚鼠通过注射曲安奈德及环磷酰胺获得,随后主气道接... 

【文章页数】：90 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分:军团菌感染致免疫抑制豚鼠肺循环变化的研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要试剂与实验仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要实验仪器
        2.2 研究对象和实验方法
            2.2.1 免疫抑制豚鼠模型的制备和分组
            2.2.2 Lp菌株及培养
            2.2.3 血常规检查
            2.2.4 外周血CD4~+T细胞、CD8+T细胞检测
            2.2.5 体温、体重、肺重量及离体肺重量测量
            2.2.6 ELISA
            2.2.7 肺组织HE染色、免疫组化及免疫荧光检查
            2.2.8 肺组织透射电子显微镜检查
            2.2.9 数据分析
    3 结果
        3.1 外周血白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞及CD4+T细胞、CD8+T细胞变化
        3.2 体温、体重、肺重量及离体肺重量变化
        3.3 血清VEGFA变化
        3.4 肺组织VEGFA、VEGFR2及VE-cadherin表达情况
        3.5 肺毛细血管内皮细胞连接超微结构改变
        3.6 肺组织HE染色及超微结构损伤情况
    4 讨论
    5 结论
第二部分:军团菌感染致免疫抑制豚鼠肠道细菌易位的研究
    6 前言
    7 材料和方法
        7.1 主要试剂与实验仪器
            7.1.1 主要试剂
            7.1.2 主要实验仪器
        7.2 研究对象和实验方法
            7.2.1 免疫抑制豚鼠模型的制备和分组
            7.2.2 Lp菌株及培养
            7.2.3 样本收集、DNA提取及检测
            7.2.4 DNA文库构建及测序
            7.2.5 肺、肝脏组织革兰氏染色
            7.2.6 肺、肝脏组织BP-FISH检查
            7.2.6 肝脏大体情况
            7.2.7 肝脏HE染色
            7.2.8 肝脏TUNEL检查
            7.2.9 肝脏组织免疫组化检查
            7.2.10 数据分析
    8 结果
        8.1 细菌16S rDNA提取结果
        8.2 小肠内容物样本目、种水平细菌构成
        8.3 肺、肝脏及血液样本种水平细菌构成
        8.4 肺、肝脏组织革兰氏染色结果
        8.5 肺、肝脏组织BP-FISH结果
        8.6 肝脏大体表现
        8.7 肝脏HE染色结果
        8.8 肝脏TUNEL结果
        8.9 肝脏细胞程序性死亡相关蛋白表达情况
    9 讨论
    10 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]Update and actual trends on bacterial infections following liver transplantation[J]. Jose Luis del Pozo.  World Journal of Gastroenterology. 2008(32)
[2]吉曼尼兹（Gimenez）染色法快速筛选阿米巴滋养体内嗜肺军团菌[J]. 沈洁,姜庆五,李勤学,陈洪友,李子华.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2005(04)



本文编号：3660122