TGF-β1 SiRNA对人肺成纤维细胞的干预作用

发布时间：2022-07-22 20:06

　　目的:特发性肺间质纤维化（IPF）是一种发病率和死亡率均较高的疾病,目前临床上缺乏有效的治疗措施。大量研究资料表明,TGF-β1是目前已知的最强烈的致纤维化细胞因子,在肺纤维化疾病进程中,TGF-β1成为关键性因子之一,因此,抑制TGF-β1的基因表达有可能会延缓肺纤维化进程。近年来随着RNA干扰技术的开展,利用其可以产生相关基因的功能缺失,故被广泛应用到基因调控的研究中。本研究通过针对人TGF-β1的mRNA序列设计并构建ShRNA真核表达载体,通过脂质体LipofectamineTM 2000转染体外培养的人LFb,观察并分析其对人类肺成纤维细胞TGF-β1表达的抑制作用,探讨用ShRNA防治肺纤维化的新途径。方法:针对人类TGF-β1 mRNA的952-970的核苷酸序列合成1条TGF-β1 siRNA绿色荧光蛋白融合表达质粒载体,在脂质体介导下转染体外培养的人肺成纤维细胞,于转染后24h、48h、72h收集细胞和上清,在荧光显微镜下观察干扰效果,采用ELISA动态观察细胞上清液中TGF-β1蛋白表达的变化及抑制效率、通过RT-PCR动态观察人肺成纤维细胞TGF-β1 mRNA的... 

【文章页数】：38 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
提要
英文缩略表
第1章 前言
第2章 材料及方法
    2.1 实验仪器及材料
    2.2 实验路线
    2.3 实验方法
    2.4 统计学处理
第3章 结果
    3.1 TGF-Β15HRNA 真核表达质粒的鉴定
    3.2 人肺成纤维细胞形态学鉴定
    3.3 绿色荧光显微镜下观察质粒转染TGF-Β1 后的基因干扰效果
    3.4 人肺成纤维细胞中TGF-Β1 的MRNA 含量测定
    3.5 人肺成纤维细胞培养上清TGF-Β1 ELISA 测定结果
第4章 讨论
    4.1 特发性肺间质纤维化的治疗现状
    4.2 TGF-Β1 与肺纤维化的关系
    4.3 RNAI 技术靶向治疗肺纤维化
第5章 结论
参考文献
导师及作者简介
致谢
中文摘要
ABSTRACT



本文编号：3665257