异硫氰酸烯丙酯上调慢性阻塞性肺疾病肺支气管上皮MRP1与Nrf2表达的研究

发布时间：2022-08-11 11:55

　　目的:通过体外细胞实验和整体动物模型,体、内外研究异硫氰酸烯丙酯（AITC）对慢性阻塞性肺疾病（COPD）肺支气管上皮MRP1和Nrf2表达的影响。方法:体外:首先,自制香烟烟雾提取物（CSE）,采用MTT法观察其对16HBE细胞的毒性,筛选CSE对16HBE细胞活力无明显影响的浓度;其次,观察CSE刺激16HBE细胞后,以Real time RT-PCR和Western Blotting法检测Nrf2和MRP1的m RNA和蛋白表达;再次,仍采用Real time RT-PCR和Western Blotting法测定,在AITC干预作用下,CSE诱导的16HBE的Nrf2和MRP1的m RNA和蛋白表达。体内:首先采用烟熏复合气管滴入脂多糖的方法制备大鼠COPD模型;然后观察AITC对COPD大鼠呼吸功能及肺组织病理学改变的影响,并采用Real time RT-PCR技术检测肺组织中MRP1,Nrf2基因的表达。结果:1.连续7天自制的香烟烟雾提取物经分析表明其稳定性好。2.MTT结果显示香烟烟雾提取物对16HBE细胞的抑制率具有浓度依赖性和时间依赖性。10%及以下浓度对16HBE细... 

【文章页数】：84 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
英文缩略词
前言
    1. COPD
    2. 香烟烟雾与COPD
    3. MRP1
    4. AITC
    5. Nrf2
第一部分 AITC体外上调CSE诱导的MRP1和Nrf2基因和蛋白表达
    1 材料与仪器
        1.1 细胞株
        1.2 实验试剂
        1.3 实验试剂的配制
        1.4 实验仪器
    2 实验方法
        2.1 香烟烟雾提取物的制备
        2.2 细胞培养技术
            2.2.1 细胞复苏
            2.2.2 细胞传代
            2.2.3 细胞冻存
        2.3 MTT法检测香烟烟雾提取物对 16HBE细胞的毒性
        2.4 香烟烟雾提取物刺激 16HBE细胞后MRP1和Nrf2的基因和蛋白表达
            2.4.1 CSE干预细胞
            2.4.2 Real time RT-PCR方法检测细胞m RNA
                2.4.2.1 细胞总RNA的提取
                2.4.2.2 RNA定量及纯度鉴定
                2.4.2.3 RNA逆转录为c DNA
                2.4.2.4 Real time RT-PCR扩增目的基因
                2.4.2.5 Real time RT-PCR分析方法
            2.4.3 Western blotting检测 16HBE细胞蛋白表达
                2.4.3.1 16HBE细胞总蛋白的提取
                2.4.3.2 BCA总蛋白定量法
                2.4.3.3 Western blotting操作步骤
        2.5 AITC预处理细胞后，CSE刺激 16HBE的MRP1和Nrf2基因和蛋白表达
        2.6 数据分析与统计
    3.结果
        3.1 CSE的制备和OD值测定
        3.2 CSE对 16HBE细胞毒性的测定
        3.3 CSE干预 16HBE不同时间点MRP1和Nrf2的基因和蛋白表达
            3.3.1 CSE干预 16HBE不同时间点MRP1和Nrf2m RNA的表达
            3.3.2 CSE干预 16HBE不同时间点MRP1和Nrf2蛋白的表达
        3.4 AITC预处理后,CSE诱导 16HBE细胞MRP1和Nrf2的表达32
            3.4.1 AITC预处理后，CSE诱导 16HBE细胞MRP1和Nrf2的m RNA表达
            3.4.2 AITC预处理后，CSE诱导 16HBE细胞MRP1和Nrf2的蛋白表达
    4.讨论
第二部分 AITC对COPD大鼠肺支气管上皮中Nrf2、MRP1表达的影响
    1 材料
        1.1 实验动物
        1.2 实验试剂
        1.3 实验仪器
    2 方法
        2.1 COPD大鼠模型的建立
        2.2 分组及给药
    3 指标的测定
        3.1 呼吸功能测定
        3.2 病理学检查
            3.2.1 肺组织取材及石蜡切片的制作
            3.2.2 肺组织标本切片HE染色
        3.3 Real time RT-PCR技术检测肺组织标本中MRP1、Nrf2基因表达
            3.3.1 肺组织总RNA的提取
            3.3.2 RNA定量及纯度鉴定
            3.3.3 RNA逆转录为c DNA
            3.3.4 Real time RT-PCR扩增目的基因
            3.3.5 Real time RT-PCR分析方法
    4 结果
        4.1 大鼠一般情况
        4.2 大鼠肺功能变化
        4.3 光镜下观察HE染色后各组肺组织的病理学改变
        4.4 Real time RT-PCR技术检测肺组织标本中MRP1、Nrf2基因表达
    5.讨论
总结
参考文献
综述
    参考文献
个人简介
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]化痰降气胶囊对COPD模型大鼠支气管上皮细胞中多药耐药相关蛋白1功能和表达的影响[J]. 汪电雷,张弦,陶秀华,张瑞,蔡莉,彭波,李泽庚.  中国中西医结合杂志. 2012(07)
[2]HE染色原理和试剂配制及染色过程中的若干问题的探讨[J]. 李红芬,郑肇巽,马品耀,平国强.  医学信息(上旬刊). 2011(04)
[3]脂多糖结合熏烟法和单纯熏烟法建立慢性阻塞性肺病大鼠模型的比较[J]. 宋小莲,王昌惠,白冲.  第二军医大学学报. 2010(03)
[4]慢性阻塞性肺疾病动物模型研究进展[J]. 周红艳,李建生.  中医研究. 2009(05)
[5]N-乙酰半胱氨酸对烟雾暴露所致大鼠慢性阻塞性肺疾病模型的影响[J]. 蔡珊,陈平,张程,陈剑波,吴杰,罗曼.  中华结核和呼吸杂志. 2008 (08)

博士论文
[1]转录因子Nrf2在香烟烟雾诱导粘蛋白MUC5AC表达中的作用[D]. 应英华.浙江大学 2012

硕士论文
[1]慢性阻塞性肺疾病患者肺组织中Nrf2、Bach1、γ-GCS表达的研究[D]. 冯青青.郑州大学 2013



本文编号：3674616