间充质干细胞通过细胞外囊泡传递miR-27a-3p减轻急性肺损伤的机制研究

发布时间：2022-09-29 11:47

　　第一部分间充质干细胞来源的细胞外囊泡分离鉴定和巨噬细胞摄取情况研究目的:脂肪来源间充质干细胞（Adipose mesenchymal stem cells,ASC）可向细胞外分泌丰富的细胞外囊泡,ASCs可减轻LPS诱导的肺损伤,其部分的作用可能通过EVs实现的。作为肺组织内的免疫细胞巨噬细胞如何受其影响,是否摄取EVs未见报道。本部分研究主要通过超速离心获取EVs并进一步鉴定,在体和离体实验证明巨噬细胞摄取一定量的EVs。为下一步证明EVs在LPS诱导的急性肺损伤发生发展中的作用。研究方法:收集培养的MSCs细胞上清采用差速超离的方法获得EVs,并用国际上标准的方法鉴定。将人单核细胞系THP-1细胞和CD63标志带荧光的EVs共培养,24h后荧光电镜观察;将用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）刺激细胞骨髓来源的巨噬细胞诱导成熟（BMDM）,与经CD63标志带荧光的EVs共培养,6h后流式细胞仪观察巨噬细胞摄取的情况;采用LPS诱导气管内滴入WT（C57BL/6）小鼠致肺损伤模型,造模后将用DID标志过的EVs气管内滴入,24 h后观察流式细胞仪检测肺泡灌洗液中巨噬细胞里DI... 

【文章页数】：154 页

【学位级别】：博士

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致谢
前言
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英文摘要
中英文缩写词对照表
引言
    参考文献
第一部分 间充质干细胞来源的细胞外囊泡分离鉴定和巨噬细胞摄取情况
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
        1.3 统计学分析
    2 结果
        2.1 MSCs来源的EVs鉴定
        2.2 体内和体外实验巨噬细胞摄入EVs
    3 讨论
    4 小结
    5 参考文献
第二部分 间充质干细胞来源的细胞外囊泡减轻急性肺损伤的研究
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
        1.3 统计学方法
    2 结果
        2.1 MSC-EVs(间充质干细胞来源的细胞外囊泡)对培养骨髓巨噬细胞(BMDMs)的作用
        2.2 体内动物实验:LPS 引起的急性肺损伤模型实验
    3 讨论
    4 小结
    5 参考文献
第三部分 间充质干细胞通过细胞外囊泡传递miR-27a-3p至巨噬细胞减轻急性肺损伤
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
        1.3 统计学方法
    2 结果
        2.1 体外miR-27a-3p转移至单核细胞或巨噬细胞
        2.2 体外慢病毒转染BMDMs实验
        2.3 小鼠气管内转染LV-anti-miR-27a-3p增加急性肺损伤
        2.4 LV-anti-miR-27a-3p转染MSCs,分离的EVs与LV-control转染MSCs,分离的EVs对急性肺损伤的影响
        2.5 双荧光素酶实验证明小鼠中miR-27a-3p的靶点之一是NFKB1
    3 讨论
    4 小结
    5 参考文献
全文结论
综述 间充质干细胞及其细胞外囊泡的功能和临床应用挑战
    参考文献
作者简历及在学期间所取得的科研成果



本文编号：3682533