干扰素-γ作用后的小鼠肺微血管内皮细胞对共培养T淋巴细胞增殖的影响及机制

发布时间：2022-12-04 05:30

　　目的探讨干扰素-γ（IFN-γ）作用后的小鼠肺微血管内皮细胞（PMVECs）对共培养T淋巴细胞增殖的影响,并探讨其可能的机制。方法分离雌性Balb/C小鼠肺组织,采用组织块贴壁法培养PMVECs;经倒置显微镜、透射电镜观察及内皮细胞表面标志CD31荧光检测鉴定,证实为PMVECs且纯度＞ 95%。在Transwell板下层小室中加入PMVECs,随机分为空白对照组、10 ng/m L组、20 ng/m L组、50 ng/m L组、80 ng/m L组,加入终浓度分别为0、10、20、50、80 ng/m L的IFN-γ,Transwell板上层小室中加入T淋巴细胞进行共培养,采用流式细胞术检测上层小室T淋巴细胞增殖指数。将第3代PMVECs随机分为观察组和对照组,分别加入终浓度为80 ng/m L的IFN-γ及等量PBS;采用反相高效液相色谱法检测细胞培养上清中色氨酸、犬尿氨酸水平及吲哚胺2,3-加氧酶（IDO）活性,RT-PCR法及Western blotting法检测细胞IDO mRNA及蛋白表达。结果空白对照组、10 ng/m L组、20 ng/m L组、50 ng/m L组、8... 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 小鼠PMVECs分离、培养及鉴定
        1.2.1 小鼠PMVECs分离、培养
        1.2.2 小鼠PMVECs鉴定
            1.2.2. 1 形态学观察
            1.2.2. 2 细胞表面抗原检测
    1.3 不同浓度IFN-γ作用后的PMVECs对共培养T淋巴细胞增殖能力影响的观察
        1.3.1 T淋巴细胞分离
        1.3.2 分组处理及T淋巴细胞增殖能力观察
    1.4 IFN-γ对PMVECs培养液上清色氨酸、犬尿氨酸水平及细胞IDO表达影响的观察
        1.4.1 细胞分组处理
        1.4.2 细胞培养上清中色氨酸、犬尿氨酸水平及IDO活性检测
        1.4.3 细胞IDO mRNA表达检测
        1.4.4 细胞IDO蛋白表达检测
    1.5 统计学方法
2 结果
    2.1 各组T淋巴细胞增殖指数比较
    2.2 观察组和对照组细胞培养上清中色氨酸、犬尿氨酸水平及IDO活性比较
    2.3 观察组和对照组细胞IDO mRNA及蛋白表达比较
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]骨髓间充质干细胞的吲哚胺2,3-双加氧酶活性抑制T淋巴细胞的增殖[J]. 唐晓琼,赵智刚,邹萍.  中华器官移植杂志. 2005(11)



本文编号：3707685