FoxO3a/p27信号通路介导脂多糖诱导肺成纤维细胞异常增殖

发布时间：2023-03-24 20:28

　　背景和目的:革兰氏阴性杆菌细胞壁的脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)是内毒素的主要成份,也是形成脓毒症相关性肺纤维化的重要致病因素。肺成纤维细胞的异常聚集和活化是肺纤维化形成的重要过程,但其具体机制未明。本研究采用LPS刺激肺成纤维细胞作为体外研究脓毒症相关性肺纤维化模型,深入探究LPS与肺成纤维细胞增殖的相互关系并明确叉头框蛋白O3a(Forkhead Box O3a,FoxO3a)和细胞周期调控负因子p27(FoxO3a/p27信号通路)在该过程中的作用,由此进一步丰富和完善LPS致肺纤维化的发病机理,为探索脓毒症相关性肺纤维化的防治手段奠定基础。方法:体外原代培养小鼠肺成纤维细胞,通过CCK8细胞增殖实验检测LPS刺激肺成纤维细胞后细胞的增殖情况;以Western Blot技术和免疫荧光技术检测LPS作用于小鼠肺成纤维细胞后细胞周期调控负因子p27蛋白的表达情况;通过胞浆胞核分离技术分别检测胞核FoxO3a和胞浆磷酸化的FoxO3a(p-FoxO3a)的表达情况;通过慢病毒转染使细胞过表达FoxO3a或者通过吉非替尼活化FoxO3a后,以Western Blo...

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略词表
1.前言
2.材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 主要试剂
        2.1.2 主要实验仪器和耗材
        2.1.3 试剂配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 小鼠肺成纤维细胞的原代培养
        2.2.2 CCK8 细胞增殖实验
        2.2.3 蛋白质的提取和Western Blot技术
        2.2.4 免疫荧光技术(Immunofluorescence,IF)检测p27 蛋白的表达
        2.2.5 FoxO3a慢病毒过表达载体及其稳转株的构建
        2.2.6 统计学处理
3.实验结果
    3.1 原代肺成纤维细胞的鉴定
    3.2 LPS刺激可引起肺成纤维细胞增殖
    3.3 LPS刺激可引起肺成纤维细胞p27 蛋白表达下调,且具有剂量依赖性
    3.4 LPS引起FoxO3a失活同时促进肺成纤维细胞增殖
    3.5 过表达FoxO3a的肺成纤维细胞稳转株的鉴定
    3.6 FoxO3a蛋白的过表达可抑转LPS刺激引起的p27 蛋白下调
    3.7 FoxO3a蛋白的过表达可抑转LPS诱导的肺成纤维细胞增殖
    3.8 吉非替尼可抑转LPS介导的FoxO3a失活
    3.9 吉非替尼可抑转LPS诱导的p27 蛋白下调
    3.10 吉非替尼可抑转LPS诱导的肺成纤维细胞增殖过程
4.讨论
5.结论
参考文献
论文发表情况
致谢



本文编号：3769795