转染DCN基因对COPD大鼠成纤维细胞(TGF-β1/Smads)信号通路的影响

发布时间：2023-04-08 06:00

　　目的:通过探究转染DCN基因对成纤维细胞TGF-β1、Smad3、Smad7表达及细胞增殖的影响,探讨DCN基因对TGF-β1/Smads信号通路的调控作用机制。方法:采用Real time PCR检测TGF-β1、Smad3和Smad7基因的表达变化。结果:通过对转染后的成纤维细胞进行Real time PCR检测、细胞增殖检测:转染组与对照组相比,DCNmRNA、Smad7mRNA表达量明显增加,而TGF-β1mRNA、Smad3mRNA表达量明显减少,差别均有统计学意义(P<0.05)。结论:通过转染DCN基因对COPD大鼠气道成纤维细胞影响的实验观测(TGF-β1、Smad3和Smad7)基因的表达变化,转染DCN基因对TGF-β1/Smads信号通路产生抑制作用,干预成纤维细胞增殖速度。

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 试验材料与分组
    1.1 试验材料
    1.2 实验分组
2 实验方法
    2.1 从大鼠气道成纤维细胞细胞中抽提总RNA
    2.2 基因的PCR扩增
    2.3 目的基因和载体连接、克隆
    2.4 质粒扩增
    2.5 质粒提取
    2.6 质粒鉴定
    2.7 质粒浓度纯度测定
3 实验结果
    3.1 菌落PCR鉴定结果
    3.2 菌落PCR呈阳性的质粒双酶切鉴定结果
    3.3 质粒测序结果
    3.4 质粒浓度、纯度测定
4 转染DCN基因对COPD大鼠气道成纤维细胞生物学行为影响
    4.1 组质粒转染成纤维细胞
    4.2 Real time PCR检测TGF-β1、Smad3和Smad7基因的表达变化
        4.2.1 Trizol法提取总RNA
        4.2.2 RNA的浓度、纯度检测
        4.2.3 变性琼脂糖凝胶电泳(完整性检测)
        4.2.4 Real time PCR检测
5 统计学方法
6 实验结果
    6.1 重组DCN基因质粒转染成纤维细胞细胞48 h后显微镜观察
    6.2 细胞提取总RNA的浓度、纯度及完整性检测
    6.3 转染DCN基因后对各组TGF-β1、Smad3、Smad7mRNA表达量影响
        6.3.1 DCN与TGF-β1、Smad3、Smad7的溶解和扩增曲线
        6.3.2 转染DCN基因后各组TGF-β1、Smad3、Smad7,mRNA相对表达量变化
7 讨 论
    7.1 TGF-β1/Smads信号传导通路在COPD气道重塑中的作用
    7.2 DCN对TGF-β1/Smads 信号传导通路影响
    7.3 DCN、TGF-β1/Smads 信号传导通路的动物实验研究



本文编号：3786153