大鼠硅肺纤维化组织cDNA消减文库的构建和差异表达基因的克隆

发布时间：2023-05-10 23:44

　　前言:肺纤维化是一组由多种病因引起的肺破坏性疾病,肺纤维化过程包括肺组织的炎症损伤、组织结构破坏以及随后伴有的肺间质细胞积聚的组织修复过程。在此过程中,肺泡巨噬细胞、肺泡上皮细胞、肺成纤维细胞等效应细胞通过分泌细胞因子、炎症介质等生物活性物质,发挥直接或间接的作用,从而使这些参与肺纤维化的多种细胞共同构成了一个复杂的细胞网络,彼此间相互影响,共同促进了病变发展。但目前对该疾病发生发展起关键作用的细胞分子机制尚不清楚,迄今为止仍未找到有效的防治措施。目前肺纤维化的动物研究模型大多数仅限于在病变早期,尚未形成典型的肺纤维化病变,因此也不能分析肺纤维化病变与其他疾病的关系。目前认为慢性阻塞性肺疾病、间质性肺病(石棉肺、硅肺、特发性间质性肺纤维化等)均为肺癌的危险因素,间质性肺纤维化引发肺癌的机制目前尚不清楚,大多数观点认为,间质性肺纤维化由于炎症损伤和修复的相互作用可导致局部上皮反复的细胞及基因损伤,通过连续的细胞形态学改变如化生,异常增生,非典型增生而最终导致肿瘤发生。故加深对肺纤维化发病机制的认识,并在此基础上发展新的治疗策略已成为更加迫切的需要。 目的:本研究拟通过建立大鼠慢性硅肺纤维...

【文章页数】：97 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
Abstract
英文缩写注解
第一章 建立大鼠硅肺纤维化动物模型
    1.1 前言
    1.2 材料与方法
        1.2.1 实验材料
        1.2.2 实验方法
    1.3 结果
        1.3.1 X线胸片结果
        1.3.2 肺组织病理学改变
    1.4 讨论
第二章 大鼠硅肺纤维化/正常肺组织差异表达基因的克隆
    2.1 前言
    2.2 实验材料
        2.2.1 组织标本
        2.2.2 主要试剂
        2.2.3 实验仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 肺组织总RNA的提取和鉴定
        2.3.2 mRNA的纯化与浓缩
        2.3.3 总RNA和mRNA的凝胶电泳分析
        2.3.4 抑制消减杂交
        2.3.5 PCR产物的浓缩
        2.3.6 硅肺纤维化肺组织差异表达基因消减cDNA文库的构建:
    2.4 实验结果
        2.4.1 硅肺纤维化肺组织和正常肺组织总RNA,mRNA的分离结果
        2.4.2 双链cDNA的合成及酶切结果:
        2.4.3 dscDNA接头的连接效率分析:
        2.4.4 消减杂交效率分析
        2.4.5 两轮PCR对消减杂交产物的特异性扩增结果
        2.4.6 硅肺纤维化/正常肺组织差异表达基因消减cDNA文库构建结果
    2.5 讨论
第三章 硅肺纤维化/正常肺组织差异表达基因的测序分析及初步鉴定
    3.1 前言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 实验材料
            3.2.1.1 大鼠硅肺纤维化/正常肺组织差异表达cDNA文库:
            3.2.1.2 主要试剂:
            3.2.1.3 主要仪器:
        3.2.2 实验方法
            3.2.2.1 菌液PCR初步筛选阳性克隆
            3.2.2.2 插入片段测序
            3.2.2.3 同源性检索和分析
            3.2.2.4 半定量RT-PCR分析
    3.3 结果
        3.3.1 插入片段的PCR扩增
        3.3.2 测序结果
        3.3.3 阳性克隆DNA序列生物信息学分析
        3.3.4 RT-PCR结果分析
    3.4 讨论
结论
参考文献
综述一
    肺纤维化与肺癌的关系及其研究进展
综述二
    Wnt信号传导通路及在原发性肝细胞癌中的进展
致谢
攻读学位期间主要研究成果



本文编号：3813731