miR-154上调Wnt/β-catenin信号通路在博来霉素诱导的小鼠肺纤维化中的作用机制研究

发布时间：2023-09-17 06:53

　　肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)是一种慢性、进展性并且通常致死的纤维化肺疾病,其特征主要表现为(肌)成纤维细胞灶的形成以及细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的过度沉积,特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是PF最为常见的表现形式。PF目前尚缺乏行之有效的治疗手段,阐明其潜在的发病机制以探寻有效治的疗靶点已迫在眉睫。Wnt/β-catenin传导通路在PF发展中发挥十分重要的作用,活化后的Wnt/β-catenin通路可以诱导肺泡上皮细胞的增殖和(肌)成纤维细胞的活化,从而引起过度ECM的分泌并沉积。并且,Wnt/β-catenin通路的特异性拮抗剂能够阻断活化的Wnt/β-catenin信号传导并遏制PF的发展。MicroRNAs(miRNAs)是一类由20-25个核苷酸构成的单链非编码RNA,miRNAs能够不完全互补于mRNA 3’端的非编码区从而抑制进靶mRNA的翻译或促进靶mRNA的裂解,多种miRNA表达的失调与PF的发展有着密切关联。Wnt/β-catenin通路在正常器官的发...

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【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
中英文缩略词表
第1章 引言
第2章 材料与方法
    2.1 仪器设备
    2.2 实验小鼠的来源及饲养
    2.3 主要试剂及其配制
        2.3.1 主要试剂
        2.3.2 抗体配制
        2.3.3 小鼠PF模型建立所用试剂配制
        2.3.4 慢病毒构建信息及慢病毒悬液配制
        2.3.5 Western Blot相关试剂配制
    2.4 实验方法及检测指标
        2.4.1 动物实验模型建立及肺组织样本收集
        2.4.2 肺组织总蛋白的提取及定量
        2.4.3 Western Blot检测蛋白表达
        2.4.4 肺组织总RNA的提取及浓度纯度测定
        2.4.5 qRT-PCR检测肺内miR-154表达
        2.4.6 H&E及Masson染色
        2.4.7 冰冻切片
    2.5 统计分析
第3章 结果
    3.1 miR-154在BLM诱导的PF模型的肺内表达升高
        3.1.1 肺纤维化模型成功建立
        3.1.2 qRT-PCR检测小鼠肺内miR-154表达
    3.2 上调的Wnt/β-catenin通路在小鼠PF模型发展中起重要作用
        3.2.1 干预模型
        3.2.2 Wester blot检测蛋白表达
        3.2.3 病理学改变和病理评分
    3.3 miR-154能够上调Wnt/β-catenin通路并在小鼠PF模型中起促纤维化作用
        3.3.1 干预模型
        3.3.2 病毒转染效率检测
        3.3.3 qRT-PCR检测肺组织内miR-154表达
        3.3.4 病理学改变和病理评分
        3.3.5 Western Blot检测蛋白表达
    3.4 miR-154的促纤维化作用是通过上调Wnt/β-catenin信号通路介导的
        3.4.1 干预模型
        3.4.2 Western Blot检测蛋白表达
        3.4.3 病理学改变和病理评分
第4章 讨论
第5章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：3847226