重组慢病毒沉默rictor基因对mTORC2/SGK1信号通路及肺泡上皮钠离子通道的调控作用

发布时间：2023-11-26 17:00

　　目的构建针对mTORC2特异组成蛋白中rictor基因的重组慢病毒沉默载体,研究其对mTORC2/SGK1信号通路的调控机制及其对肺泡上皮细胞钠离子通道的影响,并探讨其在急性呼吸窘迫综合征及急性肺损伤中的作用。方法构建目的基因的rictor干扰质粒及空载质粒并与慢病毒包装体系共转染293T细胞,收集病毒上清液,经离心、浓缩及纯化获取重组慢病毒。测定病毒滴度,感染A549细胞并筛选细胞稳定株,RT-PCR验证目的基因rictor沉默情况。采用PCR和western blot检测该通路中各信号指标表达情况。结果成功构建沉默rictor基因的重组慢病毒并感染A549细胞和获得细胞稳定株。与空白组及对照组相比,shRNA-rictor组中rictor和下游SGK1、α-ENaC、β-ENaC、γ-ENaC mRNA水平均有明显下降(P<0.05)。同时,shRNA-rictor组中rictor和下游SGK1、P-SGK、α-ENaC、β-ENaC、γ-ENaC的蛋白水平较前两组均有明显下降(P<0.05)。结论沉默rictor基因对mTORC2/SGK1信号通路有明显的调控作用,同...

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【文章目录】：
1材料与方法
2结果
3讨论



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