hIL-37基因修饰的骨髓间充质干细胞对哮喘治疗作用的研究

发布时间：2017-05-24 06:03

  本文关键词：hIL-37基因修饰的骨髓间充质干细胞对哮喘治疗作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景:全球有几亿人正遭受着哮喘的折磨,就本质而言哮喘是由多种炎症因子参与的呼吸道炎症。IL-37是IL-1家族的一员,在既往的研究中人们已经证实IL-37是一种很强的抑炎因子。Chris用IL-37转基因小鼠建立肠炎模型时发现IL-37转基因小鼠肠道病情更轻,David用IL-37干预肝炎时也发现IL-37可以有效的缓解病情,他们的研究结果充分的证明了IL-37对炎症性疾病有很好的治疗效果。IL-37因子比较昂贵且半衰期短,这让它很难直接应用于动物实验研究,在动物实验研究时必须找到一个理想的基因表达载体来分泌IL-37,MSC就是这样一种理想的基因表达载体。MSC作为基因表达载体可以高效的表达目的基因且具有向炎症部位定向归巢的作用。我们是否可以用IL-37基因修饰的MSC用于哮喘的治疗了?这个科学问题的提出和解决将为临床上哮喘的治疗提供一种新的方案。目的:研究IL-37对哮喘气道炎症的抑制作用,并探索其相关的机制。方法:体外分离培养与提纯小鼠MSC。Ad-IL-37转染MSC后用ELISA和Western检测转染Ad-IL-37后的MSC分泌IL-37的情况。建立小鼠哮喘治疗模型,通过检测血中的lgE lgG1浓度,肺泡灌洗液中IL-4 IL-5 IL-13浓度及细胞总数评价小鼠气道炎症程度。体外验证IL-37对DC的影响:实验组用LPS+IL-37处理DC 24小时候,对照组用LPS处理DC 24小时,24小时后用ELISA检测DC分泌细胞因子的情况。体外验证IL-37对OT1 OT2 T细胞增殖的影响,磁珠分选DC然后用相应的肽段OVA处理2小时,时间到后加入CFSE标记的OT1或OT2 T细胞,实验组加入IL-37三天后收集细胞进行流式分析。体外验证IL-37对惰性T细胞分化成Treg的影响,用Anti-CD3抗体刺激惰性T细胞,实验组加入IL-37+IL-2+TGF-beta对照组加入IL-2+TGF-beta五天后用流式分析结果。体外验证IL-37对Treg增殖的影响,分选出Treg染上CFSE加入一定数量的DC,实验组加入IL-37+IL-2,对照组加入IL-2,五天后流式分析。结果:通过CD45、CD11b双阴选得到纯度为90%MSC符合后续实验的要求。Ad-IL-37腺病毒成功转染MSC。ELISA及Western结果显示Ad-IL37转染后的MSC可以高效的表达IL-37。IL-37小鼠哮喘治疗模型中ELISA结果显示IL-37治疗组小鼠肺泡灌洗液中IL-4、IL-5、IL-13促炎因子浓度下降,血清中OVA-lgG1、lgE含量降低。体外实验证明IL-37抑制DC的活化,抑制OT1 OT2T细胞的增殖,促进惰性T细胞向Treg的分化,促进Treg的增殖。结论:Ad-IL37转染MSC后,MSC可以高效稳定的表达IL-37。IL-37可以有效的抑制DC的活化,抑制CD4 T CD8 T细胞的增殖同时促进Treg生成。小鼠OVA哮喘治疗模型证明IL-37可以减轻哮喘的病情。
【关键词】：IL-37 MSC Treg 哮喘 免疫抑制 DC
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R562.25
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文缩略词表9-11
• 第1章 引言11-12
• 第2章 材料与方法12-24
• 2.1 材料12-16
• 2.1.1 主要仪器12-13
• 2.1.2 主要试剂购买13-14
• 2.1.3 主要试剂的配制14-16
• 2.2 方法16-23
• 2.2.1 分离小鼠骨髓间充质干细胞与培养16
• 2.2.2 小鼠骨髓间充质干细胞提纯与鉴定16-17
• 2.2.3 细胞转染17
• 2.2.4 检测转染目的基因后MSC表达IL-37蛋白的情况17-19
• 2.2.5 建立小鼠哮喘治疗模型：19-20
• 2.2.6 流式分析模型小鼠肺泡灌洗液和脾脏中的各种免疫细胞比率及数量20
• 2.2.7 IL-37抑制DC活化及细胞因子的分泌20-21
• 2.2.8 IL-37抑制OT1 OT2细胞的增殖21-22
• 2.2.9 IL-37促进惰性T细胞向Treg分化22
• 2.2.10 IL-37促进treg细胞的增殖22-23
• 2.3 数据处理和统计学分析23-24
• 第3章 结果24-32
• 3.1 体外分离培养与提纯小鼠MSC及签定:24-25
• 3.2 IL-37在宿主细胞MSC中稳定且高效的表达25-26
• 3.3 在小鼠哮喘治疗模型中IL-37可以有效的减轻哮喘的病情26-28
• 3.4 小鼠哮喘模型中IL-37促使脾脏Treg升高抑制CD4~+T细胞活化28-29
• 3.5 IL-37抑制DC的活化29-30
• 3.6 IL-37抑制OT1 OT2细胞的增殖30
• 3.7 IL-37促进惰性T细胞向Treg分化，且促进Treg的增殖30-32
• 第4章 讨论32-34
• 第5章 结论与展望34-35
• 5.1 结论34
• 5.2 不足之处和展望34-35
• 致谢35-36
• 参考文献36-39
• 攻读学位期间的研究成果39-40
• 综述40-46
• 参考文献44-46

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