过表达miRNA-101的BMSCs通过激活内质网应激调控染尘后AM自噬的机制研究

发布时间：2024-03-05 02:01

　　目的1探讨共培养条件下转染miRNA-101的骨髓间充质干细胞对大鼠肺泡巨噬细胞(Alveolar macrophages of rats,AMs)的内质网应激是否具有保护作用。2通过检测AM内ERS相关标志物的变化,探讨转染miRNA-101的BMSCs发挥作用的可能机制。方法实验分组及模型制备:选取4周龄左右的SPF级雄性SD大鼠全骨髓贴壁法体外培养SD大鼠BMSCs至第三代。使用CD90、CD106、CD45抗体经流式细胞术对BMSCs进行鉴定,构建稳转miRNA-101的BMSCs,CCK-8检测BMSCs,转染miRNA-101的BMSCs,转染空质粒的BMSCs的细胞活性;与经过Si O2刺激的大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383细胞构建transwell共培养体系,上室培养NR8383细胞,下室培养BMSCs,中间隔有通透性的聚碳酸酯膜,孔径为0.4μm;实验分为5组。对照组:NR8383细胞完全培养;模型组:NR8383+Si O2(50μg/ml);BMSCs干预组BMSCs+(NR8383+Si O2)共培养组;miRNA-101组:过表达miRNA-101的BMSCs+...

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1倒置相差显微镜下观察BMSCs形态×200

华北理工大学硕士学位论文-14-设置酶标仪参数（测定波长为450nm，参比波长为650nm），利用酶标仪测量各组的OD值。2）Westernblot的测定及结果判定利用imagelab分析蛋白条带的光密度值，计算各组目的蛋白与内参的比值，进行后续统计学分析。3）统计学处理建立EX....

图2倒置相差显微镜下观察NR8383细胞形态A×100,B×200

第1章实验研究-15-细胞处于悬浮状态。镜下观察见多为扁圆形或偶尔类似伪足样的细胞形态（图2）。1.2.3BMSCs表型鉴定结果流式细胞检测第三代BMSCs表型鉴定结果显示，CD106，CD90，阳性细胞总数占比分别为94.45%，99.26%；CD45阳性细胞占17.50%，符....

图3流式细胞术对P3代BMSCs的表型鉴定

第1章实验研究-15-细胞处于悬浮状态。镜下观察见多为扁圆形或偶尔类似伪足样的细胞形态（图2）。1.2.3BMSCs表型鉴定结果流式细胞检测第三代BMSCs表型鉴定结果显示，CD106，CD90，阳性细胞总数占比分别为94.45%，99.26%；CD45阳性细胞占17.50%，符....

图4荧光显微镜下观察miRNA-101慢病毒转染BMSCs结果×40

华北理工大学硕士学位论文-16-时间逐渐增加，并在72小时左右达到高峰。当MOI=5pfu/细胞时，可获得最佳荧光强度和最高转染效率。BMSC生长良好，无明显死亡，表明转染滴度对细胞生长和增殖影响很校慢病毒转染72小时后，慢病毒的转染效率达到约95％，满足了本实验的需要（图4）。....

本文编号：3919503