NLRP3炎症复合体在呼吸机相关性肺损伤中的作用机制研究

发布时间：2017-07-08 13:12

  本文关键词：NLRP3炎症复合体在呼吸机相关性肺损伤中的作用机制研究

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【摘要】：目的：探讨NLRP3炎症复合体在呼吸机相关性肺损伤中的作用及其机制。方法：36只清洁级雄性SD大鼠分为3组,每组12只：对照组A组、正常潮气量组N组、大潮气量组H组,分组采用随机数字表法。所有大鼠均行气管切开插管术,A组大鼠保持自主呼吸,N、H两组分别行潮气量为8mL/kg和40 mL/kg的机械通气。4h后行颈动脉放血处死大鼠,收集BALF、血清和肺组织标本。测定三组大鼠肺组织湿/干比重；分别使用光学显微镜和透射电镜观察肺组织的病理学改变和肺泡巨噬细胞超微结构改变；使用ELISA测定BALF中总蛋白含量、BALF和血清中IL-1β、IL-18含量；分别使用RT-PCR和Western Blot检测大鼠肺泡巨噬细胞中NLRP3、ASC、caspase-1和NF-κ B的mRNA及蛋白表达水平。结果：镜下观察结果显示,A组和N组肺组织及肺泡巨噬细胞的结构基本正常,而H组有明显的炎症性改变。与A组和N组比较,H组肺组织W/D比值明显升高(9.20±0.69比5.32±0.82、5.70±0.94,均P0.05),BALF中总蛋白、IL-1 β、IL-18的含量明显升高[总蛋白(g/L)：2.53±0.38比1.92±0.23、1.98±0.24,IL-1 β(ng/L)：135.96±5.40比80.88±2.77、83.14±5.09,IL-18(μg/L)：4.68±0.45比2.95±0.54、3.51±0.46,均P0.05),血清中IL-1β、IL-18含量也明显升高[IL-1β(ng/L)：107.10±9.06比67.33±8.08、74.36±12.02,IL-18(μg/L)：2.29±0.93比1.32±0.25、1.45±0.18,均P0.05)。H组肺泡巨噬细胞中NLRP3、ASC、caspase-1和NF-κ B的mRNA及蛋白表达水平较对照组A组和N组均明显升高,H组上述指标的mRNA表达分别是对照组A组的(13.35±2.30)、(9.04±1.92)、(8.43±2.18)、(9.65±1.88)倍,蛋白表达分别是对照组A组的(1.37±0.71)、(1.25±0.08)、(1.35±0.16)、(1.66±0.19)倍,差异均有统计学意义；而N组各指标与对照组A组比较均轻微升高,但差异均无统计学意义。结论：NLRP3炎症复合体参与了大潮气量机械通气所致的大鼠急性肺损伤。
【关键词】：呼吸机相关性肺损伤 肺泡巨噬细胞 NLRP3炎症复合体 炎症细胞因子
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R563
【目录】：

• 个人简历3-7
• 主要英文及缩略词表7-8
• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-16
• 一、实验材料16-18
• 1、动物来源16
• 2、主要试剂16-17
• 3、主要仪器17-18
• 二、实验方法18-43
• 1、实验分组及动物模型建立18
• 2、纳入实验大鼠标准18-19
• 3、标本采集和处理19-20
• 4、大鼠肺泡巨噬细胞分离提取及鉴定20-22
• 5、肺组织湿干比重(W/D)检测22
• 6、HE染色观察肺组织大体形态22-24
• 7、透射电镜观察肺泡超微结构24-25
• 8、血清和BALF中总蛋白含量的检测25-26
• 9、血清和BALF中IL-1β和IL-18的检测26-31
• 10、肺泡巨噬细胞中总RNA的提取31-32
• 11、肺泡巨噬细胞中NLRP3、ASC、caspase-1和NF-κB mRNA的检测32-38
• 12、肺泡巨噬细胞总蛋白的提取和浓度检测38
• 13、肺泡巨噬细胞中NLRP3、ASC、caspase-1和NF-κB蛋白检测38-42
• 14、统计学处理42-43
• 三、结果43-51
• 1、各组肺组织湿干比重的比较43-44
• 2、各组肺组织的大体形态44
• 3、电镜下肺泡巨噬细胞超微结构44
• 4、肺泡巨噬细胞检测44-47
• 5、血清和BALF中总蛋白浓度47
• 6、血清和BALF中IL-1β和IL-18的表达47-48
• 7、肺泡巨噬细胞中NLRP3、ASC、caspase-1和NF-κB mRNA的表达48-49
• 8、肺泡巨噬细胞中NLRP3、ASC、caspase-1和NF-κB蛋白的表达49-51
• 四、讨论51-55
• 五、结论55
• 参考文献55-65
• 综述65-77
• 参考文献70-77
• 致谢77-79
• 攻读硕士学位期间发表论文79

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本文编号：534691