TGF-β对小鼠肺内TREM-1表达的影响及其机制

发布时间：2017-07-20 02:04

  本文关键词：TGF-β对小鼠肺内TREM-1表达的影响及其机制

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【摘要】：髓样细胞表达触发受体-1(TREM-1)可通过放大Toll样受体(TLR)及Nod样受体(NLR)介导的免疫应答信号,延长巨噬细胞寿命,发挥炎症放大作用。TGF-β被公认为肺纤维化最为关键的致纤维化因子,TREM-1可显著上调TGF-β家族的表达,而TGF-β对TREM-1表达的影响尚未见报道。 目的： 观察TGF-β对小鼠肺内TREM-1表达的影响并探讨其机制。 方法： Swiss小鼠经气管一次性注射博莱霉素(BLM)15mg/kg复制肺纤维化模型,分别于第7、14和21天处死。HE染色和Masson染色验证肺纤维化小鼠模型是否建立成功；Real-time PCR或RT-PCR检测Ⅰ、Ⅲ型胶原、TGF-β、TREM-1及其转录因子c-Jun的转录水平；Western Blot检测小鼠肺组织TREM-1的蛋白含量；流式细胞术检测含TREM-1的阳性细胞数,以反映小鼠巨噬细胞TREM-1的蛋白水平；定点突变技术和双荧光素酶报告基因试验证明转录因子c-Jun参与TGF-β上调小鼠巨噬细胞TREM-1表达的转录机制。结果： 肺纤维化小鼠模型建立成功。小鼠肺组织TGF-β和TREM-1表达在BLM组第7、14和21天均增加(P0.05),且二者呈正相关(r=0.787,P0.05)。TGF-β呈时间和剂量依赖性上调小鼠巨噬细胞TREM-1mRNA和蛋白水平(P0.05)。小鼠肺组织c-Jun mRNA表达在BLM组第7、14和21天增加(P0.05),且分别与TGF-β(r=0.713,P0.05)、TREM-1的表达呈正相关(r=0.906,P0.05)。TGF-p呈时间和剂量依赖性上调小鼠巨噬细胞c-Jun mRNA表达(P0.05)。定点突变技术和双荧光素酶报告基因试验结果显示：TGF-β刺激显著增加TREM-1野生型质粒的相对荧光强度(P0.05),而对TREM-1突变型质粒(TREM-1的AP-1位点定点突变)无明显影响(P0.05)。PKC抑制剂H-7、CaM抑制剂W-7及MAPK抑制剂PD98059显著逆转TGF-β诱导小鼠巨噬细胞TREM-1mRNA和蛋白水平的上调(P0.05)。 结论： 1.TREM-1在肺纤维化小鼠肺组织中表达增加。 2.肺纤维化小鼠肺组织TGF-β与TREM-1的表达呈正相关。 3.TGF-β上调小鼠巨噬细胞TREM-1表达,其机制通过PKC、CaM及MAPK信号通路增加TREM-1的转录因子c-Jun水平。
【关键词】：肺纤维化 TGF-β TREM-1 c-Jun
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R563
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略词表10-11
• 前言11-12
• 1 材料与方法12-35
• 1.1 实验材料12-14
• 1.1.1 实验动物12
• 1.1.2 细胞12
• 1.1.3 主要试剂12-13
• 1.1.4 常用缓冲液配制13-14
• 1.1.5 主要仪器14
• 1.2 实验方法14-35
• 1.2.1 小鼠肺纤维化模型的复制14-15
• 1.2.2 小鼠肺组织形态学观察15-16
• 1.2.3 RT-PCR或Real-time PCR检测小鼠肺内和巨噬细胞目的基因mRNA的表达16-20
• 1.2.4 Western Blot检测小鼠肺组织TREM-1蛋白含量20-24
• 1.2.5 流式细胞术检测小鼠巨噬细胞表面TREM-1蛋白水平24-25
• 1.2.6 定点突变与质粒构建25-30
• 1.2.7 质粒抽提及阳性克隆的鉴定30-32
• 1.2.8 转染与双荧光素酶报告基因试验32-34
• 1.2.9 统计学分析34-35
• 2 结果35-56
• 2.1 肺纤维化小鼠肺组织TREM-1的表达35-39
• 2.1.1 小鼠肺组织HE染色35
• 2.1.2 小鼠肺组织Masson染色35-36
• 2.1.3 小鼠肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA水平的变化36-37
• 2.1.4 小鼠肺组织TGF-β mRNA水平的变化37-38
• 2.1.5 小鼠肺组织TREM-1表达的变化38-39
• 2.2 TGF-B对小鼠肺内TREM-1表达的影响39-42
• 2.2.1 小鼠肺组织TGF-β与TREM-1表达之间的相关性分析39-40
• 2.2.2 TGF-β不同时间刺激小鼠巨噬细胞TREM-1表达的改变40-41
• 2.2.3 不同剂量TGF-β刺激小鼠巨噬细胞TREM-1表达的改变41-42
• 2.3 TGF-B对小鼠巨噬细胞TREM-1表达影响的机制42-56
• 2.3.1 TGF-β上调TREM-1与c-Jun的关系42-45
• 2.3.2 TREM-1野生型和突变型质粒的构建45-52
• 2.3.3 转录因子c-Jun与TREM-1启动子的结合活性检测52
• 2.3.4 PKA、PKC、CaM和MAPK信号通路抑制剂对TGF-β刺激小鼠巨噬细胞TREM-1表达的影响52-54
• 2.3.5 不同信号通路抑制剂对TGF-β刺激小鼠巨噬细胞转录因子c-Jun转录水平的影响54-56
• 3 讨论56-59
• 4 结论59-60
• 综述60-68
• 参考文献68-79
• 攻读学位期间主要的研究成果79-84
• 在读期间发表的学术论文和会议摘要79-82
• 在读期间主持和参与的课题82-83
• 在读期间获得奖项83-84
• 致谢84

【共引文献】

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本文编号：565757