茶碱通过抑制NF-κB活性而减轻过氧化氢暴露下骨骼肌细胞的炎症

发布时间：2017-07-29 18:19

  本文关键词：茶碱通过抑制NF-κB活性而减轻过氧化氢暴露下骨骼肌细胞的炎症

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【摘要】：目的观察茶碱对过氧化氢暴露下C2C12小鼠成肌细胞(C2C12细胞)炎症的抑制作用。方法 (1)观察不同浓度过氧化氢(H2O2)和茶碱对细胞生长的影响：以C2C12细胞为研究对象,细胞分化成熟后使用终浓度分别为0.1mmol/L、 0.2mmol/L、0.3mmol/L、0.4mmol/L、0.6mmol/L和0.8mmol/L的H2O2,和终浓度分别为1 mol/L、0.1 mol/L、0.01 mol/L、0.001 mol/L和0.0001 mol/L的茶碱干预细胞24h,进一步采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法确定对C2C12细胞的合适药物浓度。(2)观察茶碱是否能下调过氧化氢暴露下C2C12细胞内核因子-κB(NF-κB)的表达和炎症介质释放：将分化好的细胞分为空白对照组、过氧化氢组(过氧化氢干预细胞24小时)、茶碱组(茶碱干预细胞24小时)、过氧化氢+茶碱组(过氧化氢和茶碱共同干预细胞24小时)、吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)+过氧化氢组。采用酶联免疫吸附试验(ELIS A)检测细胞培养上清白细胞介素-8(IL-8)口肿瘤坏死因子-a(TNF-a)的含量,实时荧光定量聚酶链反应(RT-PCR)检测细胞内NF-κB mRNA相对表达量的情况,蛋白印迹实验(Western blot)检测细胞内NF-κB蛋白的表达情况,凝胶迁移实验(EMSA)检测细胞核内NF-κB活性。数据采用SPSS17.0统计软件进行统计分析。结果 (1)选择浓度为0.4%的过氧化氢和0.001 mol/L的茶碱对C2C12细胞生长无明显影响。(2)茶碱对炎症因子(IL-8、TNF-α)的影响：过氧化氢组细胞上清液炎症因子(IL-8、TNF-α)含量明显高于空白对照组及茶碱组(P0.05),茶碱+过氧化氢组IL-8、TNF-α较过氧化氢组减少(P0.05)；PDTC+过氧化氢组炎症因子(IL-8、TNF-a)明显低于过氧化氢组(P0.05)。(3)茶碱对NF-κB的mRNA相对表达量的影响：过氧化氢组NF-κB的mRNA相对表达量明显高于空白对照组及茶碱组(P0.05),茶碱+过氧化氢组NF-κB的mRNA相对表达量较过氧化氢组减少(P0.05); PDTC+过氧化氢组NF-κB的mRNA相对表达量明显低于过氧化氢组(P0.05)。(4)茶碱对NF-κB蛋白表达量的影响：过氧化氢组NF-κB蛋白表达量明显高于空白对照组及茶碱组(P0.05),茶碱+过氧化氢组NF-κB蛋白表达量较过氧化氢组减少(P0.05)；PDTC+过氧化氢组NF-κB蛋白表达量明显低于过氧化氢组(P0.05)。(5)茶碱对NF-κB细胞核内活性的影响：过氧化氢组NF-κB细胞核内活性明显高于空白对照组及茶碱组(P0.05),茶碱+过氧化氢组NF-κB细胞核内活性较过氧化氢组减少(P0.05),较PDTC+过氧化氢组升高(P0.05); PDTC+过氧化氢组NF-κ B细胞核内活性明显低于过氧化氢组(P0.05)。结论 茶碱可以下调过氧化氢暴露下C2C12小鼠成肌细胞内N F-κB的活性,减少IL-8和TNF-α的释放,抑制骨骼肌细胞炎症。
【关键词】：氧化应激 核因子-κB 骨骼肌炎症
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R563.9
【目录】：

• 个人简历3-5
• 主要缩略词表5-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 前言11-13
• 材料和方法13-37
• 实验结果37-46
• 讨论46-51
• 结论51-52
• 参考文献52-57
• 综述57-74
• 参考文献64-74
• 致谢74-76
• 2013年-2016年攻读硕士学位期间发表的论文76

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