巨噬细胞亚型及Lunx基因在渗出性胸腔积液中作用的研究

发布时间：2017-07-31 18:08

  本文关键词：巨噬细胞亚型及Lunx基因在渗出性胸腔积液中作用的研究

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【摘要】：背景：结核性胸腔积液和恶性胸腔积液是渗出性胸腔积液中最常见的两种类型。巨噬细胞是胸腔积液中的主要细胞组分，具有吞噬、清除异物和衰老伤亡细胞的功能，在机体的固有免疫应答中发挥了重要作用。巨噬细胞还是一种重要的抗原呈递细胞，可以有效的向T细胞呈递抗原，进而诱导T细胞的激活。根据巨噬细胞的功能巨噬细胞可以被分为两种极化类型：M1型和M2型。M1型主要起促炎、抗肿瘤的作用；而M2型主要起炎症修复和促进肿瘤生长的作用。巨噬细胞的不同活化状态是决定其在疾病中发挥作用的基础。巨噬细胞是机体抗结核免疫的第一道防线，结核分枝杆菌进入机体后能否存活或复制，与巨噬细胞的功能状态密切相关；另一方面,肿瘤相关的巨噬细胞可以通过释放许多趋化因子促进肿瘤生长和血管生成,并且可以降解基质促进肿瘤侵袭和转移。巨噬细胞在结核性和恶性胸腔积液患者胸腔局部免疫中到底发挥了什么作用还有待进一步研究。另外，尽管近年来肿瘤的诊疗技术取得了长足的进步，但对于良恶性胸腔积液的鉴别临床上还存在一定的困难。细胞学检测是区分良恶性胸腔积液的最主要的方法，然而胸水中过度增生的间皮细胞、组织细胞和退行性的间皮细胞通常显示特殊的形态学特征,使得肿瘤细胞难于识别。人类肺组织特异性基因Lunx在肺组织中特异表达，而在其他人类肿瘤及正常组织中极少表达或不表达，Lunx基因在快速鉴别浆膜腔积液的良恶性以及在判定浆膜腔积液中恶性肿瘤细胞的来源方面,可能具有一定的应用价值。因此本课题旨在明确结核性和恶性胸腔积液中巨噬细胞亚群的变化，为进一步研究巨噬细胞在二者的发生及发展中所发挥的作用提供理论基础；另外通过进一步检测胸腔积液中Lunx基因的表达水平，评价Lunx基因检测在恶性胸腔积液诊断中的作用及临床意义。 目的：通过检测巨噬细胞及其亚型在结核性胸膜炎和恶性胸腔积液中的表达，探讨巨噬细胞在渗出性胸腔积液发病机制中的作用，进一步通过检测恶性胸腔积液中Lunx基因的表达，，评估Lunx基因检测的价值及临床意义。 方法：通过流式细胞技术检测结核性胸膜炎和恶性胸腔积液患者外周血、胸腔积液巨噬细胞亚型及其相关细胞因子的表达，采用微量样本多指标流式蛋白定量技术(CBA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TNF-, IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10,IL-12和TGF-β细胞因子的含量，并分析其与临床指标之间的关系。采用实时定量RT-PCR检测胸水Lunx mRNA的表达水平。临床指标中血细胞计数、血沉、结核斑点实验、胸水酸碱度、白蛋白、乳酸脱氢酶、癌胚抗原、脱落细胞等均由检验科或病理科专科医生完成。 结果：1.结核性胸膜炎患者外周血CD14+CD163-M1、CD14+CD163-IL-12+M1型巨噬细胞的数量较健康对照组明显增高，但低于相应的胸腔积液；增高的外周血CD14+CD163-IL-12+M1型巨噬细胞的数量与血清IL-12浓度呈明显正相关。 2.结核性胸膜炎患者外周血CD14+CD163+M2、 CD14+CD163+CD206+M2、CD14+CD163+CD115+M2和CD14+CD163+CD206+CD115+M2型巨噬细胞的数量明显多于相应的胸腔积液。 3.结核性胸膜炎患者外周血CD14+CD163-MAC387+M1和CD14+CD163-MAC387-M1型巨噬细胞的数量明显高于健康对照组，但是低于相应的胸腔积液。 4.结核性胸膜炎患者血清IL-1, IL-6, IL-8, IL-12, TNF和TGF-的浓度明显高于健康对照组,但低于相应的胸腔积液，而血清IL-10浓度和健康对照组比较无统计学差异，但仍低于相应的胸腔积液水平。 5.结核性胸膜炎患者血清TNF-和IL-12水平与ESR、 ESAT-6-IFN-γ-T、CFP-10-IFN-γ-T细胞数量呈明显正相关，而胸水中TNF-水平与ADA和LDH呈明显正相关。 6.恶性胸腔积液患者外周血CD14+CD163+M2、CD14+CD163+IL-10+M2型巨噬细胞的数量较健康对照组明显增高，但低于相应的胸腔积液。外周血CD14+CD163-IL-12+M1型巨噬细胞的数量明显低于健康对照组，但高于相应的胸腔积液。 7.恶性胸腔积液患者外周血CD14+CD163+M2、 CD14+CD163+CD206+M2、CD14+CD163+CD115+M2和CD14+CD163+CD206+CD115+M2型巨噬细胞的数量较健康对照组明显增高，但低于相应的胸腔积液。 8.恶性胸腔积液患者外周血CD14+CD163+MAC387+M2和CD14+CD163+MAC387-M2型巨噬细胞的数量明显高于健康对照组，但是低于相应的胸腔积液。 9.恶性胸腔积液患者血清IL-1, IL-6, IL-8, IL-10, TNF和TGF-的浓度明显高于健康对照组,但低于相应的胸腔积液，而血清IL-12浓度与健康对照组和相应的胸腔积液比较无统计学差异。 10.恶性胸腔积液患者胸水TNF-水平与CEA、LDH呈明显正相关，而IL-10水平与CEA呈明显正相关。 11. Lunx mRNA诊断肺癌所致恶性胸腔积液的特异性为95.9%，敏感性为84.9%，ROC曲线下面积为0.922，明显高于胸水脱落细胞和CEA的0.821和0.798。 12. Lunx mRNA在肺特异性表达，所有Lunx mRNA阳性的恶性胸腔积液患者均被诊断为肺癌，而所有肺外肿瘤所致的恶性胸腔积液患者Lunx mRNA表达均为阴性，LunxmRNA对于肿瘤细胞来源的阳性预测值为100%。 13.在CR和PR组, Lunx mRNA的表达水平在第1疗程化疗结束后明显下降，而在NC组没有明显变化，PD组则显著增加。 14.在Lunx mRNA表达下降组，患者的中位生存时间是53周,而在Lunx mRNA表达上升组，患者的中位生存时间是25周，Lunx mRNA表达下降组的总生存期要明显长于Lunx mRNA表达上升组。 结论：1.新发结核性胸膜炎患者体内巨噬细胞亚型以M1型为主，并且以胸膜腔局部表现更为明显，提示我们结核分枝杆菌感染诱发的促炎的M1型巨噬细胞反应参与了结核性胸膜炎的早期发病过程。 2.恶性胸腔积液患者胸水中肿瘤相关巨噬细胞主要表现为M2型，进一步证实了M2型巨噬细胞在恶性胸腔积液发生与发展中的作用。 3. Lunx mRNA可以作为诊断肺癌所致恶性胸腔积液的标志物之一，推荐临床广泛应用，监测恶性胸腔积液患者化疗前后Lunx mRNA表达水平的变化有助于临床医生预测患者对治疗的反应性，监测病情并进一步评估患者的预后。
【关键词】：巨噬细胞亚群 肺特异性X蛋白 结核性胸腔积液 恶性胸腔积液
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R561.3
【目录】：

• 前言4-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-17
• 中英文缩略词对照表17-19
• 第1章 文献综述19-27
• 1.1 巨噬细胞亚型的研究进展19-22
• 1.1.1 巨噬细胞的分型及功能19-20
• 1.1.2 巨噬细胞亚型与疾病的关系20-22
• 1.1.3 展望22
• 1.2 肺癌相关肿瘤标志物的研究现状22-27
• 1.2.1 神经元烯醇化酶(Neuron specific enolase, NSE)22-23
• 1.2.2 前胃泌素释放肽(ProGRP)和胃泌素释放肽 (GRP)23
• 1.2.3 半胱天冬酶裂解的细胞角蛋白 19 片段(CYFRA21.1)23-24
• 1.2.4 组织多肽抗原 (Tissue polypeptide antigen,TPA)24
• 1.2.5 癌胚抗原( Carcinoembryonic antigen，CEA)24-25
• 1.2.6 鳞癌细胞抗原(Squamous cell carcinoma antigen, SCC-Ag)25
• 1.2.7 肺特异性 X 蛋白（Lunx 蛋白）25-26
• 1.2.8 小结26-27
• 第2章 巨噬细胞亚群及其功能在新发结核性胸膜炎中作用的研究27-55
• 2.1 引言27-28
• 2.2 材料与方法28-34
• 2.2.1 研究对象28
• 2.2.2 临床指标28-29
• 2.2.3 标本采集29
• 2.2.4 主要试剂和仪器29-31
• 2.2.5 外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cells，PBMC）分离31
• 2.2.6 细胞计数31
• 2.2.7 巨噬细胞的表型测定31-32
• 2.2.8 巨噬细胞功能的测定32
• 2.2.9 微量样本多指标流式蛋白定量技术（Cytometric bead array，CBA) 检测血浆和胸水炎症细胞因子水平32-33
• 2.2.10 酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)检测血清和胸水 TGF-β水平33-34
• 2.2.11 统计学分析方法34
• 2.3 结果34-51
• 2.3.1 结核性胸膜炎患者的一般信息和临床特点34-35
• 2.3.2 结核性胸膜炎患者 T-SPOT.TB 试验的结果分析35-36
• 2.3.3 结核性胸膜炎患者 CD14+CD163-M1 型和 CD14+CD163+M2 型巨噬细胞的表达36-37
• 2.3.4 结核性胸膜炎患者 CD14+CD163+M2 型巨噬细胞相关受体的表达37-40
• 2.3.5 结核性胸膜炎患者 CD14+CD163-M1 型和 CD14+CD163+M2 型巨噬细胞表面 MAC387 的表达40-41
• 2.3.6 结核性胸膜炎患者 CD14+CD163-IL-12+M1 型和 CD14+CD163+ IL-10+M2 型巨噬细胞的表达41-44
• 2.3.7 结核性胸膜炎患者多种炎症细胞因子的表达44-47
• 2.3.8 结核性胸膜炎患者巨噬细胞亚群和细胞因子间的相关性47-48
• 2.3.9 结核性胸膜炎患者细胞因子水平和临床指标间的相关性48-51
• 2.4 讨论51-54
• 2.5 小结54-55
• 第3章 巨噬细胞亚群及其功能在恶性胸腔积液中作用的研究55-73
• 3.1 引言55-56
• 3.2 材料与方法56-57
• 3.2.1 研究对象56
• 3.2.2 临床指标56
• 3.2.4 主要试剂和仪器56
• 3.2.5 外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cells，PBMC）分离56-57
• 3.2.6 细胞计数57
• 3.2.7 巨噬细胞的表型测定57
• 3.2.8 巨噬细胞的功能测定57
• 3.2.9 CBA 和 ELISA 法检测血清和胸水炎症细胞因子水平57
• 3.2.10 统计学分析方法57
• 3.3 结果57-68
• 3.3.1 恶性胸腔积液患者的一般信息和临床特点57-58
• 2.3.2 恶性胸腔积液患者 CD14+CD163-M1 型和 CD14+CD163+M2 型巨噬细胞的表达58-59
• 2.3.3 恶性胸腔积液患者 CD14+CD163+M2 型巨噬细胞相关受体的表达59-61
• 2.3.4 恶性胸腔积液患者 CD14+CD163-M1 型和 CD14+CD163+M2型巨噬细胞表面 MAC387 的表达61-62
• 2.3.5 恶性胸腔积液患者 CD14+CD163-IL-12+M1 型和CD14+CD163+IL-10+M2 型巨噬细胞的表达62-64
• 2.3.6 恶性胸腔积液患者 M1 型和 M2 型细胞因子的表达64-67
• 2.3.7 恶性胸腔积液患者细胞因子水平和临床指标间的相关性67-68
• 3.4 讨论68-71
• 3.5 小结71-73
• 第4章 LUNX MRNA 检测对肺癌所致恶性胸腔积液诊断的优越性和临床意义73-89
• 4.1 引言73-74
• 4.2 材料和方法74-77
• 4.2.1 研究对象74
• 4.2.2 支气管镜检查74-75
• 4.2.3 细胞学检测75
• 4.2.4 胸膜活检75
• 4.2.5 胸腔积液的临床检测75
• 4.2.6 实时定量 RT-PCR 法检测 Lunx mRNA 表达75-77
• 4.2.7 统计学分析77
• 4.3 结果77-85
• 4.3.1 胸腔积液患者的一般信息和临床特征77
• 4.3.2 肺癌所致恶性胸腔积液患者的化疗情况77-80
• 4.3.3 不同组别胸腔积液患者的 Lunx mRNA 的表达80-82
• 4.3.4 Lunx mRNA 水平、脱落细胞、CEA 检测对肺癌所致恶性胸腔积液的诊断效益比较82
• 4.3.5 Lunx mRNA 与肿瘤分化程度的相关性82-83
• 4.3.6 Lunx mRNA 对肿瘤来源的预测83
• 4.3.7 Lunx mRNA 表达水平变化与化学治疗反应的相关性83-84
• 4.3.8 治疗前后 Lunx mRNA 表达水平的变化与患者总体生存率的相关性84-85
• 4.4 讨论85-87
• 4.5 小结87-89
• 第5章 结论89-90
• 创新点90-91
• 参考文献91-107
• 附录107-109
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果109-111
• 致谢111

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 章必成;赵勇;王俊;郭燕;饶智国;高建飞;;人肺腺癌肿瘤相关巨噬细胞的活化表型鉴定[J];武汉大学学报(医学版);2009年05期

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3 袁祖贻;郜珊珊;;巨噬细胞亚型在动脉粥样硬化过程中的作用及淋巴细胞对其亚型分化作用的影响[J];西安交通大学学报(医学版);2013年03期

本文编号：600427