牛磺熊去氧胆酸缓解转化生长因子-β1诱导的MRC-5纤维化表型

发布时间：2017-08-02 05:04

  本文关键词：牛磺熊去氧胆酸缓解转化生长因子-β1诱导的MRC-5纤维化表型

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【摘要】：肺纤维化是慢性弥漫性间质炎症性肺疾病,以进行性呼吸困难及肺功能下降为主要临床表现,以持续的过度的创伤愈合反应为特点。纤维化相关因子,尤其是转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对于成纤维细胞的异常调节在肺纤维化进程中起到了至关重要的作用。寻找合适的抗纤维化药物和阻止纤维化疾病的策略,已经持续了好几十年,但是理想的治疗手段还没有找到。特发性肺纤维化患者肺泡上皮细胞内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ER stress)和未折叠蛋白反应(unfolded protein response, UP R)的活化明显增加,表明ER stress在纤维化的进程中发挥重要作用。而牛磺熊去氧胆酸(Tauroursodeoxycholic acid, TUDCA)和熊去氧胆酸(Ursodeoxycholic acid, UDCA)可以减少内质网应激。为研究TUDCA(?)UDCA对于肺纤维化缓解的作用,建立人胚肺成纤维细胞(MRC-5)纤维化模型,并用TUDCA和UDCA实施干预,检测纤维化标志物α-平滑肌肌动蛋白和纤连蛋白表达情况。本研究发现,TUDCA对TGF-β1诱导的α-平滑肌肌动蛋白和纤连蛋白升高的纤维化表型,均有明显预防和治疗作用。所以,牛磺熊去氧胆酸可以起到一定的缓解转化生长因子-β1诱导的成纤维细胞的纤维化作用,待作用机制摸透,可潜在成为新的抗纤维化药物。
【关键词】：牛磺熊去氧胆酸 肺纤维化 转化生长因子-β1 内质网应激 氯喹
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R563
【目录】：

• 中文摘要7-8
• Abstract8-9
• 英文缩略语表9-11
• 前言11-13
• 第一节 MRC-5细胞纤维化模型的建立13-25
• 1. 实验材料13-16
• 1.1 细胞株13
• 1.2 主要化学试剂和试剂盒13
• 1.3 细胞培养用耗材及试剂13
• 1.4 主要设备和仪器13
• 1.5 主要溶液配方13-16
• 2. 实验方法16-21
• 2.1 细胞培养16-17
• 2.2 RNA样品的处理17-19
• 2.3 蛋白样品的处理19-21
• 3. 实验结果21-24
• 3.1 实时定量PCR检测α-SMA mRNA表达情况21-22
• 3.2 实时定量PCR检测纤连蛋白mRNA表达情况22-23
• 3.3 Western Blot检测α-SMA蛋白水平的表达情况23
• 3.4 Western Blot检测纤连蛋白在蛋白水平的表达情况23-24
• 4. 总结24-25
• 第二节 氯喹对于MRC-5细胞纤维化模型的干预25-32
• 1. 实验材料25-26
• 1.1 细胞株25
• 1.2 主要化学试剂和试剂盒25
• 1.3 细胞培养用耗材及试剂25
• 1.4 主要设备和仪器25
• 1.5 主要溶液25-26
• 2. 实验方法26-27
• 2.1 细胞培养26
• 2.2 RNA样品的处理26
• 2.3 蛋白样品的处理26-27
• 3. 实验结果27-31
• 3.1 实时定量PCR检测氯喹干预MRC-5纤维化模型α-SMAmRNA表达情况27-28
• 3.2 实时定量PCR检测氯喹干预MRC-5纤维化模型纤连蛋白mRNA表达情况28-29
• 3.3 Western Blot检测α-SMA蛋白水平的表达情况29-30
• 3.4 Western Blot检测纤连蛋白在蛋白水平的表达情况30-31
• 4. 总结31-32
• 第三节 TUDCA对于MRC-5细胞毒性检测32-34
• 1. 实验材料32
• 1.1 细胞株32
• 1.2 主要化学试剂32
• 1.3 细胞培养用耗材及试剂32
• 1.4 主要设备和仪器32
• 1.5 主要溶液配方32
• 2. 实验方法32-33
• 3. 实验结果33
• 4. 总结33-34
• 第四节 TUDCA对于MRC-5细胞纤维化模型的干预34-40
• 1. 实验材料34-35
• 1.1 细胞株34
• 1.2 主要化学试剂和试剂盒34
• 1.3 细胞培养用耗材及试剂34
• 1.4 主要设备和仪器34
• 1.5 主要溶液34-35
• 2. 实验方法35-36
• 2.1 细胞培养35
• 2.2 RNA样品的处理35
• 2.3 蛋白样品的处理35-36
• 3. 实验结果36-39
• 3.1 实时定量PCR检测TUDCA干预MRC-5纤维化模型=α-SMA mRNA表达情况36-37
• 3.2 实时定量PCR检测TUDCA干预MRC-5纤维化模型纤连蛋白的mRNA表达情况37
• 3.3 Western Blot检测TUDCA干预MRC-5纤维化模型α-SMA蛋白表达情况37-38
• 3.4 Western Blot检测TUDCA干预MRC-5纤维化模型纤连蛋白表达情况38-39
• 4. 总结39-40
• 第五节 UDCA对于MRC-5细胞毒性检测40-42
• 1. 实验材料40
• 1.1 细胞株40
• 1.2 主要化学试剂40
• 1.3 细胞培养用耗材及试剂40
• 1.4 主要设备和仪器40
• 2. 实验方法40
• 3. 实验结果40-41
• 4. 总结41-42
• 第六节 UDCA对于MRC-5细胞纤维化模型的干预42-47
• 1. 实验材料42-43
• 1.1 细胞株42
• 1.2 主要化学试剂和试剂盒42
• 1.3 细胞培养用耗材及试剂42
• 1.4 主要设备和仪器42
• 1.5 主要溶液42-43
• 2. 实验方法43-44
• 2.1 细胞培养43
• 2.2 RNA样品的处理43
• 2.3 蛋白样品的处理43-44
• 3. 实验结果44-46
• 3.1 实时定量PCR检测UDCA干预MRC-5纤维化模型α-SMA mRNA表达情况44
• 3.2 实时定量PCR检测UDCA干预MRC-5纤维化模型纤连蛋白mRNA表达情况44-45
• 3.3 Western Blot检测TUDCA干预MRC-5纤维化模型α-SMA蛋白表达情况45-46
• 3.4 Western Blot检测UDCA干预MRC-5纤维化模型纤连蛋白表达情况46
• 4. 总结46-47
• 讨论47-48
• 参考文献48-50
• 综述50-55
• 参考文献53-55
• 致谢55-57
• 个人简历57-58

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