维吾尔族饲鸽者肺免疫相关分子基因多态性、甲基化与细胞失衡机制的研究

发布时间：2017-08-06 11:12

  本文关键词：维吾尔族饲鸽者肺免疫相关分子基因多态性、甲基化与细胞失衡机制的研究

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【摘要】：目的:维吾尔族饲鸽者肺免疫相关分子基因多态性、甲基化与细胞失衡机制的研究(MIP-1α基因单核苷酸多态性、HLA-DRB5基因甲基化及CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞与维吾尔族饲鸽者肺易感性的相关研究)方法:1)根据纳入及排除标准收集资料,总纳入92例,其中饲鸽者肺组32例、阴性对照组(饲鸽未患病组)30例及正常对照组(健康体检组)30例。对纳入者的全血标本进行DNA提取,根据UCSC数据库中SNP位点的序列信息,利用Mass ARRAY技术设计引物、完成样品制备、PCR扩增、SAP、单碱基延伸、点样质谱检测对MIP-1α基因各位点进行多态性分析;2)对纳入者的全血标本进行DNA提取、亚硫酸氢盐转化、PCR扩增、体外转录和RNase A特异性酶切,并行基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析技术检测HLA-DRB5基因甲基化情况;3)根据纳入标准收集PBL病例组32例,其中急性期15例、慢性期17例,阴性对照组30例。采集所有纳入者的血样标本,采用流式细胞仪检测受试者外周血的CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例和T淋巴细胞亚群。上述资料采用SPSS17.0软件进行基本情况统计分析,其他采用SAS软件进行统计分析,H-W检验不平衡者均采用趋势卡方检验。结果:1)与正常对照组相比,患病组与阴性对照组血清中MIP-1α浓度均有明显的增高(P0.05);2)检测已报道的MIP-1α基因24个位点,其中rs1049191、rs1049195、rs3210166、rs1130374、rs5029407 rs1063340、rs190805628七个位点在维吾尔族饲鸽者中存在基因多态性(见质谱图);3)Hardy-Weinberg平衡检验:MIP-1α基因rs1049191、rs1049195、rs3210166、rs1130374、rs5029407位点的基因型分布经检验均不符合Hardy-Weinberg平衡定律(P0.05),rs1063340位点基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定律(P0.05);4)饲鸽者肺组、阴性对照组及正常对照组三组基因型频率分布比较:rs1049191、rs1049195、rs3210166、rs1130374、rs5029407、rs190805628位点的基因型频率分布差异有统计学意义(P0.05);rs1063340位点基因型分布频率比较差异无统计学意义(P0.05);三组间各位点等位基因频率分布比较差异均无统计学意义(P0.05);5)饲鸽者肺组与正常组(阴性对照组及正常对照组)两组之间基因型频率分布比较:rs1049191、rs1049195、rs3210166、rs1130374、rs5029407位点基因型分布频率差异有统计学意义(P0.05);rs1063340及rs190805628位点基因型分布频率在两组间比较差异无统计学意义(P0.05);6)连锁不平衡检验:本组SNPs位点经检验10组之间存在强的连锁不平衡:分别是rs1049191与rs1049195、rs1130374、rs3210166、rs5029407之间强LD;rs1049195与rs1130374、rs3210166、rs5029407之间强LD;rs1130374与rs3210166、rs5029407之间强LD;rs3210166与rs5029407之间强LD;C-C-G-G-C-C-C与T-A-G-A-C-G-T两种单体型可能与疾病发生相关;7)检测到HLA-DRB5片段的18个Cp G位点,Cp G1、Cp G2/3/4、Cp G5/6/7、Cp G8/9/10、Cp G11/12/13、Cp G14、Cp G16/17/18/19,各个位点在三组样本中的甲基化率比较差异不具有统计学意义(P0.05);8)与对照组相比,急性期组、慢性期组外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例、CD4+CD25+Treg细胞比例明显降低,尤以急性期组降低显著(P0.01);而急性期组和慢性期组比较,CD4+CD25+Treg细胞比例的差异无显著性(P0.05);9)与对照组相比,急性期组和慢性期组外周血中CD4+T细胞%、CD4+/CD8+比值明显减少、CD8+T细胞%明显增加;三组结果比较差异有具有统计学意义(P0.01);10)急性期组和慢性期组外周血中CD4+/CD8+比值与其外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例和CD4+CD25+Treg细胞的比例均呈正相关(r值分别为0.864和0.34,P0.05)。结论:1)MIP-1α基因rs1049191、rs1049195、rs3210166、rs1130374、rs5029407、rs190805628、rs1063340位点在维吾尔人群中存在基因多态性;2)接触鸽子会引起MIP-1α浓度的增高,但尚未发现血清MIP-1α浓度增高与PBL发病存在相关性;3)MIP-1α基因单核苷酸多态性与维吾尔族饲鸽者肺遗传易感性相关。其作用机制可能是MIP-1α基因外显子及启动子区SNP影响MIP-1α基因的转录和表达,继而影响PBL疾病的发生;4)CC、GG基因型可能是维吾尔族PBL的易感因素,携带CC、GG基因型可能会增加维吾尔族饲养鸽子者患PBL的风险,这将从基因角度对于疾病的预防起到十分关键的作用;5)未发现HLA-DRB5基因甲基化与维吾尔族饲鸽者肺之间存在关联;6)维吾尔族饲鸽者肺患者体内CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的表达下调及过度消耗可能是饲鸽者肺发病机制中的重要因素,Treg细胞在维吾尔族饲鸽者肺发病的主要分子生物学机制可能是Th1/Th2机制失衡。通过流式法检测外周血Treg细胞比例及淋巴细胞亚群变化有助于协助诊断PBL疾病,目前国内外尚无此相关报道。
【关键词】：饲鸽者肺 维吾尔族 MIP-1α基因多态性 HLA-DRB5基因甲基化 Treg细胞
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R563.1
【目录】：

• 摘要9-11
• Abstract11-14
• 前言14-18
• 第一部分 MIP-1α 基因多态性与维吾尔族饲鸽者肺易感性的相关研究18-53
• 1 研究内容与方法19-28
• 1.1 研究对象19-20
• 1.2 主要试剂和仪器设备20-21
• 1.3 研究内容21
• 1.4 研究方法21-28
• 1.5 技术路线28
• 1.6 统计学分析28
• 2 结果28-47
• 3 讨论47-52
• 4 小结52-53
• 第二部分 HLA-DRB5基因甲基化与维吾尔族饲鸽者肺相关研究53-72
• 1 研究内容与方法53-61
• 1.1 研究对象53-54
• 1.2 主要试剂和仪器设备54-56
• 1.3 研究内容56
• 1.4 实验方法56-60
• 1.5 技术路线60
• 1.6 结果判读60
• 1.7 统计学分析60-61
• 2 结果61-66
• 3 讨论66-71
• 4 小结71-72
• 第三部分 CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞与维吾尔族饲鸽者肺的相关研究72-85
• l 研究内容与方法72-75
• 1.1 研究对象72-73
• 1.2 研究内容73
• 1.3 研究方法73-75
• 1.4 统计学分析75
• 2 结果75-79
• 3 讨论79-84
• 4 小结84-85
• 结论85-86
• 致谢86-87
• 参考文献87-100
• 附录100-106
• 综述 过敏性肺炎：饲鸽者肺的病因、临床特点及发病机制研究106-117
• 参考文献113-117
• 攻读博士学位期间获得的学术成果117-119
• 个人简历119-120
• 导师评阅表120

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 娄春艳;李敏;李丽;;哮喘小鼠气道重塑过程中CD4~+CD25~+调节性T细胞和Th17细胞表达的动态变化[J];中国当代儿科杂志;2015年09期

2 Mohammad Reza Abbaszadegan;Omeed Moaven;Hamid Reza Sima;Kamran Ghafarzadegan;Azadeh A'rabi;Mohammad Naser Forghani;Hamid Reza Raziee;Ali Mashhadinejad;Mostafa Jafarzadeh;Ehsan Esmaili-Shandiz;Ezzat Dadkhah;;p16 promoter hypermethylation:A useful serum marker for early detection of gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2008年13期

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本文编号：629598