采用ChIP-chip技术分析大鼠肺成纤维细胞转分化前后全基因组蛋白H3K4三甲基化水平的改变

发布时间：2017-08-13 21:28

  本文关键词：采用ChIP-chip技术分析大鼠肺成纤维细胞转分化前后全基因组蛋白H3K4三甲基化水平的改变

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【摘要】：目的研究经二氧化硅(Si O_2)染毒的肺成纤维细胞(LF)转分化前后全基因组蛋白H3赖氨酸4(H3K4)三甲基化(met3)水平的改变。方法原代培养大鼠肺泡巨噬细胞(AM)和LF,采用transwell共培养,建立共培养模型,用100 mg·L~(-1)游离Si O_2粉尘染毒AM 24 h,收集LF细胞,免疫组织化学法对转分化后的LF进行表型鉴定。采用染色质免疫共沉淀联合芯片技术(Ch IP-chip)对LF全基因组蛋白H3K4met3进行高通量筛选,采用染色质免疫共沉淀-实时荧光定量聚合酶联反应技术(Ch IP-q PCR)验证芯片结果,采用定量逆转录聚合酶联反应技术(q RT-PCR)检测H3K4出现显著差异的m RNA表达水平。结果通过对经Si O_2染毒前后LF全基因组蛋白H3K4met3水平的对比,共筛选出1815个基因存在H3K4显著性差异(Cy3/Cy5比值2.0或0.5,Nimble Scan V2.5软件),其中518个基因出现H3K4met3程度增高,1297个基因H3K4met3程度降低。随机挑选2个差异表达基因nfib和kpna3,以Ch IP-q PCR和q RT-PCR方法验证,取得与Cp G岛芯片一致的结果。结论经Si O_2染毒的LF转分化前后全基因组蛋白H3K4met3水平存在显著改变。Ch IP-chip技术有利于进一步揭示矽肺纤维化发生的分子机制,有助于发现新的蛋白标志物和基因干预靶点。
【作者单位】： 郑州大学公共卫生学院;
【关键词】： 成纤维细胞 二氧化硅 肺泡巨噬细胞 染色质免疫共沉淀 组蛋白H赖氨酸 甲基化
【基金】：国家自然科学基金(81102109);国家自然科学基金(81472954)~~
【分类号】：R563
【正文快照】： 目前,尘肺病仍是中国最严重的职业病,而矽肺是尘肺病中危害最严重的一种。长期吸入游离二氧化硅(Si O2)粉尘,导致肺成纤维细胞(lung fi-broblast,LF)转分化为肌成纤维细胞(myofibro-blast,MF)是矽肺发病重要的细胞基础[1]。细胞转分化是指分化完全的细胞在某些因素的刺激下,丢

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