香烟烟雾提取物对RLE-6TN细胞的损伤以及萝卜硫素和N-乙酰半胱氨酸的保护作用

发布时间：2017-08-14 19:06

  本文关键词：香烟烟雾提取物对RLE-6TN细胞的损伤以及萝卜硫素和N-乙酰半胱氨酸的保护作用

  更多相关文章： 香烟烟雾提取物 肺泡Ⅱ型上皮细胞 萝卜硫素 Nrf2 N-乙酰半胱氨酸

【摘要】：研究背景：香烟烟雾作为慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)发病的重要危险因素,其对上皮细胞的损伤是通过多种复杂机制产生的,其中氧化应激是重要的部分。萝卜硫素(sulforaphane, SFN)对细胞产生的保护作用是通过激活Nrf2-ARE信号通路进而实现的抗氧化保护作用,N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine, NAC)作为一种已知抗氧化作用明确的保护剂,在本实验中进行使用。 研究目的：观察SFN对于在香烟烟雾刺激下RLE-6TN细胞的保护作用及初步探讨其机制,并进一步观察NAC对RLE-6TN细胞的保护作用。 研究方法：选用RLE-6TN细胞进行常规培养,分成如下4组：不经处理的对照组(control),只加入5%香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract, CSE)的5%CSE组,经过0.5μM SFN预处理12小时后再加入5%CSE的SFN+5%CSE组以及同时加入lmMNAC和5%CSE的NAC+5%CSE组。使用MTT法检测不同浓度的香烟烟雾提取物以及萝卜硫素对细胞活性的影响。使用Hoechst33258进行细胞核染色观察形态改变。使用流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,周期改变以及使用DCFH-DA探针检测细胞内活性氧的水平。使用RT-PCR法和Western Blot法分别检测Nrf2在mRNA以及蛋白水平的表达。另外使用RT-PCR法检测了与细胞周期调控和凋亡相关的细胞因子IGFBP-2、IGFBP-3、IGFBP-5以及P53、P21的mRNA表达情况。 实验结果：根据MTT法的检测结果,我们选用5%CSE作为对RLE-6TN细胞的刺激的损伤浓度,用0.5μM的SFN对细胞进行12小时的预处理。通过流式细胞术,观察到CSE的刺激使RLE-6TN细胞周期发生G1期阻滞,而在SFN预处理组和NAC处理组,阻滞现象得到缓解；SFN和NAC能分别使CSE导致的RLE-6TN细胞凋亡现象(%)由78.08±0.97降低至6.12±0.33和12.35±1.16,并使CSE刺激下细胞内活性氧水平(%)由86.63±1.21降低至28.03±0.26和58.27±2.77。根据RT-PCR的实验结果显示SFN能够明显促进Nrf2mRNA的表达,与对照组相比增高达8倍；同时Western Blot结果提示SFN和NAC均可促进Nrf2在蛋白水平的表达。根据RT-PCR法对IGFBP-2、IGFBP-3、IGFBP-5以及P53、P21在mRNA水平表达情况的检测结果表明,当RLE-6TN细胞受到CSE的氧化损伤刺激后,IGFBP-3、IGFBP-5和P53的mRNA表达上升有显著性意义,而通过SFN的预处理后,IGFBP-5mRNA的表达与香烟组对比有显著性差异,经过NAC的保护后,IGFBP-3、IGFBP-5和P53的mRNA表达均显著性降低。 结论：香烟烟雾提取物对RLE-6TN细胞造成的损伤呈现毒性剂量依赖关系,引起细胞活性氧含量明显增高,并造成细胞凋亡现象。而SFN和NAC能够有效降低细胞内ROS的产生,缓解由于CSE刺激所造成的细胞周期阻滞,并拮抗细胞凋亡,其作用机理可能与促进Nrf2的高表达有关。此外,SFN和NAC均可减低CSE刺激下增高的IGFBP-3、IGFBP-5和P53的mRNA表达水平,提示SFN和NAC还有可能通过对上述因子的调节来促进细胞增殖和损伤修复。
【关键词】：香烟烟雾提取物 肺泡Ⅱ型上皮细胞 萝卜硫素 Nrf2 N-乙酰半胱氨酸
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R563.9
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-7
• 主要英文缩写词中英文对照表7-8
• 目录8-10
• 前言10-12
• 第一章 香烟烟雾提取物对RLE-6TN细胞的损伤,萝卜硫素和N-乙酰半胱氨酸的保护作用以及与Nrf2的关系12-37
• 1 材料与方法12-20
• 1.1 主要实验仪器12-13
• 1.2 主要实验试剂13
• 1.3 细胞培养13
• 1.4 香烟烟雾提取物的制备13-14
• 1.5 MTT法检测香烟烟雾提取物(CSE)毒性14
• 1.6 MTT法检测萝卜硫素(SFN)毒性14
• 1.7 细胞周期分析14-15
• 1.8 细胞凋亡检测15
• 1.9 Hoechst 33258染色15
• 1.10 ROS水平检测15-16
• 1.11 RT-PCR法检测Nrf2,IGFBP-2,IGFBP-3,IGFBP-5以及P53和P21的mRNA16-18
• 1.12 Western blot法检测Nrf2的蛋白水平18-20
• 1.13 统计学分析20
• 2 结果20-32
• 3 讨论32-34
• 4 结论34-35
• 参考文献35-37
• 第二章 综述：肺泡巨噬细胞及其相关细胞因子与慢性阻塞性肺疾病相互关系研究进展37-45
• 摘要37
• Abstract37-38
• 慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)38-39
• 一、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)39-40
• 二、白细胞介素(interleukin,IL)40-41
• 三、肿瘤坏死因子(tumornecrosis factor-a,TNF-a)41
• 四、其他相关因子41-42
• 小结42-43
• 参考文献43-45
• 攻读硕士研究生期间研究成果45-46
• 致谢46-47

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 温源;蔡莉;;MMP-12在非小细胞肺癌中的研究进展[J];中国肺癌杂志;2014年01期

2 汪灏;胡广奋;谢飚;杨慧;喻宁芬;;基质金属蛋白酶及其抑制剂在RSV感染诱发哮喘中的作用[J];广州医药;2013年06期

3 谢衬梨;赵一菊;廖政邦;杨磊;丘福满;陈恒燕;温泳涛;颜建辉;蔡杰;吕嘉春;;慢性阻塞性肺疾病和支气管哮喘患者中ADAM33基因功能多态性及与吸烟的交互作用[J];广东医学;2013年22期

4 胡娜;崔天盆;;慢性阻塞性肺疾病相关基因研究进展[J];国际检验医学杂志;2014年01期

5 周忠林;;有氧运动肺康复治疗慢性阻塞性肺疾病患者效果研究[J];河北医学;2013年11期

6 刘英锋;郭光会;师琨;;AECOPD合并CCP患者诱导痰中IL-18和IL-8的表达及沙美特罗/氟替卡松的干预作用[J];临床肺科杂志;2013年12期

7 刘军;易群;;幽门螺杆菌感染与慢性阻塞性肺疾病关系的meta分析[J];临床肺科杂志;2014年01期

8 傅丹;旷寿金;贺亮;徐畅;;IL-21、MMP-2与TIMP-1在哮喘小鼠小气道及肺组织中的表达及布地奈德干预后的影响[J];湖南师范大学学报(医学版);2013年04期

9 游晓星;马小华;刘良专;曾焱华;朱翠明;何军;蒋传好;余敏君;吴移谋;;支原体巨噬细胞活化脂肽-2经PI3K/Nrf2诱导单核细胞表达HO-1和NQO1[J];中南医学科学杂志;2014年01期

10 管频;陈娟;冯光球;吴洁;;COPD患者肺组织中Smad蛋白、TGF-β_1表达与气道重塑的关系[J];海南医学;2014年12期

中国博士学位论文全文数据库 前8条

1 杨东斌;吸烟对重型颅脑损伤伴发肺损伤的影响及穿心莲内酯在吸烟诱发肺损伤中的保护机制研究[D];郑州大学;2013年

2 姜洋;活化二价锌离子对碱烧伤后角膜融解病理机制中基质金属蛋白酶抑制作用的研宄[D];北京协和医学院;2013年

3 俞巧;Caveolin-1在香烟烟雾提取物诱导气道粘蛋白MUC5AC高分泌中的作用[D];中南大学;2013年

4 王鑫慧;细胞内不同氧化还原因子调节胰岛功能的信号通路及生理机制[D];华南理工大学;2013年

5 崔海瑛;迷迭香酸对局灶性脑缺血再灌注损伤小鼠的脑保护及作用机制研究[D];河北医科大学;2014年

6 王伟;Nrf2-ARE信号通路在癫痫脑损伤中的作用及莱菔硫烷的神经保护机制研究[D];河北医科大学;2014年

7 孙雪皎;红霉素联合地塞米松对烟草烟雾暴露下单核细胞炎症作用的影响及机制研究[D];广西医科大学;2014年

8 王伟伟;内质网应激—自噬对脑缺血再灌注能量代谢障碍与氧化应激的影响[D];吉林大学;2014年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 洪佳;靶向氧化淀粉微球目标释放莱菔素的研究[D];北京化工大学;2013年

2 盖晓丽;莱菔硫烷对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠血脑屏障的保护作用及机制的探讨[D];河北医科大学;2013年

3 高增艳;红霉素对COPD大鼠组蛋白去乙酰化酶2活性与糖皮质激素抵抗的影响及机制[D];郑州大学;2013年

4 谢佳峻;IL-17F基因多态性与慢性阻塞性肺疾病相关性研究[D];广西医科大学;2013年

5 侯硕;沙美特罗替卡松粉吸入剂对COPD患者体液免疫功能的影响[D];遵义医学院;2013年

6 张晓婷;血清超敏C反应蛋白在支气管哮喘急性发作期的临床应用价值[D];大连医科大学;2012年

7 于美玲;大剂量N-乙酰半胱氨酸对治疗中、重度慢性阻塞性肺疾病有效性的研究[D];大连医科大学;2012年

8 白云涛;黄绿青霉毒素对HepG2细胞的DNA损伤毒性及氧化应激机制的研究[D];大连医科大学;2012年

9 马骏之;羟化酪醇对SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞的保护作用研究[D];华东师范大学;2013年

10 董旭婷;维生素C对细菌内毒素所致小鼠氧化损伤的作用[D];安徽医科大学;2013年

，

本文编号：674218