肺痨康对耐异烟胼肺结核小鼠TLR2、TLR4、IL2及miRNA-155表达的影响及作用机制初探

发布时间：2017-08-18 21:30

  本文关键词：肺痨康对耐异烟胼肺结核小鼠TLR2、TLR4、IL2及miRNA-155表达的影响及作用机制初探

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【摘要】：目的：考察中药肺痨康对耐异烟肼肺结核小鼠受体蛋白、细胞因子及miRNA表达的影响,初步探讨肺痨康治疗耐异烟肼肺结核的免疫-炎症机制。方法：本研究采用小鼠尾静脉注射法建立耐异烟肼肺结核动物模型,随机分为耐异烟肼组(模型组)、异烟肼组、肺痨康组及异烟肼联合肺痨康组,分别给予生理盐水、异烟肼、肺痨康、异烟肼联合肺痨康灌胃治疗56天；另设空白对照组,给予生理盐水灌胃。①比较小鼠一般体征及体重变化,造模4周后取小鼠肺脏组织进行细菌培养；治疗结束后肉眼及光镜下观察小鼠肺、肝、脾三脏组织病理变化。②免疫组化方法,检测各组小鼠肺组织中TLR2、TLR4、IL2的含量。③ 实时定量PCR检测法,测定各组小鼠肺组织中miRNA-155的表达水平。结果：①与空白组比较,模型组小鼠体重变化有统计学意义(P0.05),肺脏细菌培养可见明显菌落生长；与模型组比较,肺痨康及异烟肼联合肺痨康治疗可改善感染结核小鼠的皮毛、精神状况及进食等一般状态,使小鼠的体重正常增长(P0.05),使小鼠肺、肝、脾脏炎症显著减轻(P0.05)。②与空白组比较,模型组TLR2、TLR4含量明显升高(P0.05),IL2明显降低(P0.05)；与模型组比较,肺痨康及异烟肼联合肺痨康治疗对TLR2、TLR4的高表达有显著下调作用(P0.05),且能显著升高IL2的含量(P0.05)。③与空白组比较,模型组miRNA-155的表达显著上调(P0.05)；与模型组比较,肺痨康及异烟肼联合肺痨康治疗可明显抑制高表达的miRNA-155 (P＜0.05)。结论：①从造模后动物的一般体征、客观指标及模型的稳定性等方面进行判断分析,采用小鼠尾静脉注射法建立肺结核小鼠模型是成功的。②肺痨康治疗耐异烟肼肺结核模型小鼠,能显著改善小鼠的一般体征及组织病变,减轻肺、肝、脾脏炎症反应,抑制TLR2、TLR4蛋白及miRNA-155基因的高表达,同时显著升高细胞因子IL-2的表达。③耐异烟肼结核分枝杆菌感染动物后可引起TLR2、TLR4及miRNA-155表达的显著上调,肺痨康对耐异烟肼肺结核的治疗作用机制可能是通过抑制TLR2、TLR4及 miRNA-155的高表达,阻断相关炎症信号转导通路的激活及相关炎症基因的表达,减弱了由它们介导的炎性因子的释放,同时促进T细胞生长因子IL-2的分泌,增强机体免疫力,从而抑制炎症反应,减轻组织病理损伤,起到免疫抗感染的作用。
【关键词】：肺痨康 耐异烟肼肺结核 炎症反应 免疫力
【学位授予单位】：成都中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R521
【目录】：

• 中文摘要2-4
• 英文摘要4-6
• 英文缩略词表6-11
• 引言11-14
• 实验研究14-31
• 一 肺结核小鼠模型的建立14-20
• 1 实验材料14-15
• 1.1 实验动物14
• 1.2 实验菌株14
• 1.3 主要试剂14
• 1.4 主要仪器与设备14
• 1.5 实验场地14-15
• 2 实验方法15
• 2.1 造模菌株的制备15
• 2.2 造模方法15
• 3 检测指标15-17
• 3.1 模型小鼠一般体征15
• 3.2 模型小鼠肺、肝、脾脏形态改变15-16
• 3.2.1 肉眼下小鼠肺、肝、脾形态的观察15
• 3.2.2 光镜下小鼠肺、肝、脾形态的观察15-16
• 3.3 肺脏结核菌培养菌落计数16-17
• 3.4 统计学处理方法17
• 4 实验结果17-19
• 4.1 模型小鼠体征的改变17-18
• 4.1.1 一般状态的改变17
• 4.1.2 体重的变化17-18
• 4.2 模型小鼠肺、肝、脾脏形态改变18-19
• 4.2.1 肉眼下小鼠肺、肝、脾形态的观察18
• 4.2.2 光镜下小鼠肺、肝、脾形态的观察18-19
• 4.3 肺脏菌落计数结果19
• 5 小结19-20
• 二 肺痨康对耐异烟肼肺结核模型小鼠TRL2、TRL4、IL2及miRNA-155表达的影响及作用机制初探20-31
• 1 实验材料20-21
• 1.1 实验动物20
• 1.2 主要药材与试剂20-21
• 1.2.1 治疗用药20
• 1.2.2 主要试剂20-21
• 1.3 实验仪器及设备21
• 1.4 实验场地21
• 2 实验方法21-22
• 2.1 肺结核小鼠模型制备及分组21-22
• 2.2 药物治疗22
• 3 检测指标及方法22-26
• 3.1 模型小鼠一般体征22
• 3.2 模型小鼠肺、肝、脾的形态观察22
• 3.2.1 肉眼下小鼠肺、肝、脾形态的观察22
• 3.2.2 光镜下肺、肝、脾病理形态的观察22
• 3.3 模型小鼠肺组织TLR2、TLR4、IL2的测定22-24
• 3.3.1 标本准备22
• 3.3.2 标本检测22-23
• 3.3.3 结果判定23-24
• 3.4 模型小鼠肺组织miRNA-155的测定24-26
• 3.4.1 标本准备24
• 3.4.2 标本检测24-26
• 3.5 统计分析26
• 4 实验结果26-31
• 4.1 模型小鼠体征的改变26-28
• 4.1.1 一般状态的改变26-27
• 4.1.2 体重的变化27-28
• 4.2 模型小鼠肺、肝、脾脏形态改变28-29
• 4.2.1 肉眼下小鼠肺、肝、脾形态的观察28
• 4.2.2 光镜下小鼠肺、肝、脾形态的观察28-29
• 4.3 模型小鼠肺组织TLR2、TLR4、IL2的变化29-30
• 4.4 模型小鼠肺组织miRNA-155的变化30-31
• 讨论31-46
• 1 耐药肺结核研究及治疗概要31-36
• 1.1 西医对耐药肺结核的研究与治疗31-33
• 1.1.1 西医对肺结核病因及发病机制的认识31-32
• 1.1.2 西医对耐药肺结核的认识32-33
• 1.1.2.1 耐药结核病产生的原因32
• 1.1.2.2 耐异烟肼结核产生的机制32-33
• 1.1.3 西医对耐药肺结核的治疗33
• 1.2 中医对肺结核的研究与治疗33-36
• 1.2.1 中医对肺结核病因病机的认识33-34
• 1.2.2 中医对肺结核的治疗34-36
• 2 肺痨康的来源、组方结构及立方依据36-39
• 2.1 肺痨康的来源及组成36
• 2.2 肺痨康的立方依据及配伍意义36-39
• 2.2.1 肺痨康用药分析36-38
• 2.2.2 肺痨康立方依据及配伍意义38-39
• 3 肺结核小鼠模型评价及肺痨康对耐异烟肼肺结核小鼠的治疗作用39
• 3.1 肺结核小鼠动物模型的评价39
• 3.2 肺痨康对耐异烟肼肺结核模型小鼠的治疗作用39
• 4 肺痨康治疗耐异烟肼肺结核的作用机制初探39-45
• 4.1 肺痨康对模型小鼠肺组织TLR2、TLR4、IL2的影响42-44
• 4.2 肺痨康对模型小鼠肺组织miRNA-155的影响44-45
• 5 肺痨康对耐异烟肼肺结核小鼠抗炎作用机制初探小结45-46
• 结论46-47
• 问题与展望47-48
• 致谢48-49
• 参考文献49-54
• 附件1：附图54-59
• 附件2：文献综述59-64
• 参考文献62-64
• 附件3：在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果64-65

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1 陈曦,马s，

本文编号：696910