无创清醒挪威褐鼠过敏性哮喘模型建立及应用雷公藤多苷治疗的探索

发布时间：2017-08-19 00:26

  本文关键词：无创清醒挪威褐鼠过敏性哮喘模型建立及应用雷公藤多苷治疗的探索

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【摘要】：目的建立卵蛋白(OVA)致敏激发后,在挪威褐鼠无创且清醒的状态下,可观察和记录到过敏性哮喘发作全过程即速发相(EAR)和迟发相(LAR)的动物模型。并应用此模型,研究雷公藤多苷(GTW)对过敏性哮喘EAR和LAR的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法第一部分：模型建立66只挪威褐鼠按致敏液(OVA和Al(OH)3)不同平均分为11组,单纯注射OVA的4组(0.01、0.1、1和10mg/只)；OVA混合Al(OH)3干粉的5组(0.1+100、1+100、10+100、1+52和1+4 mg/只)；OVA混合A1(OH)3胶体的1组(10+4 mg/只)；正常对照组1组。于第0天和第5天在每只动物背部选取2点进行皮下注射,对10个致敏组注射相应致敏液,对正常对照组注射生理盐水,每点均注射0.2m1。在第37天,所有动物雾化吸入5%OVA 10 min激发。然后立即放入体积描记器中连续记录16h呼气相延长参数(Penh)值,绘制Penh变化曲线,计算EAR Penh曲线下面积(AUC)、LAR AUC、EAR峰值、LAR峰值、LAR持续时间和EAR及LAR出现次数。采集第0、7、14、21、28、35、38天血清,用ELISA法检测血清中特异性IgE含量。HE染色观察肺病理改变。第二部分：药物治疗30只挪威褐鼠平均分为5组,即正常对照组、模型组和3个GTW组。采用OVA致敏激发挪威褐鼠,清醒动物体积描记器记录16 h反映气道阻力变化的Penh值,计算EAR AUC、LAR AUC、LAR持续时间,建立无创清醒挪威褐鼠过敏性哮喘发作全程记录模型。3个GTW组动物分别于第30至第37天灌胃给予GTW10、50和200mg·kg-1,每次2 mL,每天1次。正常对照组和模型组给予等量生理盐水。HE染色观察肺、肝和肾脏病理改变。检测谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、肌酐(CR)、血清尿素氮(BUN)值,分析药物肝肾毒性。采用实时荧光定量PCR的方法(RT2 Profiler PCR Array Rat Allergy Asthma)筛选差异表达基因。结果第一部分：模型建立除单纯注射OVA 0.01mg组外,其他各组大鼠血清特异性IgE含量均比正常对照组显著升高(P0.05),且在致敏1周后IgE开始大量产生,直到第5周均呈持续增长趋势(以OVA 10+Al(OH)3100组为例)。观察到了哮喘发作的速发和迟发双相气道反应,其特点表现在Penh值的显著增高,且与正常对照组相比,模型组(以OVA 10+Al(OH)3100、OVA 10+Al(OH)3 gel 4组为例)的EAR峰值、LAR峰值、LAR持续时间、EAR AUC和LARAUC均显著增大(P0.05)。模型组(以OVA 10+Al(OH)3100组为例)有以气道周围嗜酸性粒细胞浸润为主的炎症表现。第二部分：药物治疗在给予GTW 50 mg·kg1治疗后特异性IgE含量比模型组显著降低(P0.05)。给予GTW 10.50 和 200 mg·kg-1治疗后,EAR AUC.LAR AUC.LAR持续时间均比模型组显著降低(P0.05)；生化指标ALT均比模型组显著升高(P0.05),且随药物剂量增加,ALT数值增大；CR数值也均比模型组显著升高(P0.05)；AST和BUN两个指标在给药后没有明显变化；均未对肝肾造成明显毒性病理改变。GTW能减轻肺部嗜酸性粒细胞浸润,且随剂量增加嗜酸性粒细胞数量减少。GTW能使过敏性哮喘中异常调节的基因发生明显改善,其中变化最明显的基因为Mmp9,在药物治疗后出现明显下调,且下调强度有剂量依赖性增强的趋势,在给予GTW 10、50和200 mg.kg1治疗后,下调3.62、7.67、38.15倍(P0.05)。结论在OVA激发后观察到了哮喘发作全程,成功建立了非创伤性、清醒状态挪威褐鼠的过敏性哮喘发作全程记录模型。确立以稳定出现哮喘EAR和LAR的OVA 10+Al(OH)3100组方法为本模型的最佳造模方法。发现GTW能减轻哮喘发作时的EAR和LAR,对哮喘有治疗作用,其可能主要通过下调Mmp9的表达而达到治疗目的；同时也表明该模型可以作为一个较好的工具应用于哮喘治疗研究。
【关键词】：过敏性哮喘 Penh 速发相反应 迟发相反应 雷公藤多苷
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R562.25
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 文献综述10-24
• 过敏性哮喘动物模型研究进展10-18
• 参考文献15-18
• 雷公藤内酯醇治疗过敏性哮喘的实验研究进展18-24
• 参考文献21-24
• 前言24-32
• 一、研究背景24-29
• 二、研究目的和意义29-30
• 三、研究内容及技术路线30-32
• 第一部分 无创清醒挪威褐鼠过敏性哮喘发作全程记录模型的建立32-48
• 材料与方法32-37
• 1 材料32-34
• 1.1 动物32
• 1.2 主要试剂32-33
• 1.3 主要溶液配制33-34
• 1.4 主要仪器34
• 2 实验方法34-37
• 2.1 致敏及分组处理34-35
• 2.2 血清采集35
• 2.3 支气管激发试验及肺组织取材35-36
• 2.4 ELISA法检测IgE抗体36
• 2.5 HE染色观察肺病理变化36-37
• 2.6 数据处理及统计分析方法37
• 结果37-44
• 1 特异性IgE结果37-40
• 2 哮喘发作全过程记录结果40-43
• 3 肺组织病理检测结果43-44
• 讨论44-47
• 小结47-48
• 第二部分 雷公藤多苷对过敏性哮喘挪威褐鼠的治疗作用48-67
• 材料与方法48-57
• 1 材料48-51
• 1.1 动物48
• 1.2 主要试剂48-49
• 1.3 主要溶液配制49-51
• 1.4 主要仪器51
• 2 实验方法51-57
• 2.1 哮喘模型的建立及分组处理51-52
• 2.2 ELISA法检测血清特异性IgE52-53
• 2.3 HE染色观察肺、肝和肾组织病理改变53
• 2.4 血生化指标检测53
• 2.5 Real-Time PCR方法检测肺组织84个哮喘相关基因表达53-56
• 2.6 统计分析方法56-57
• 结果57-63
• 1 雷公藤多苷对过敏性哮喘挪威褐鼠哮喘速发相、迟发相的影响57-59
• 2 雷公藤多苷对过敏性哮喘挪威褐鼠特异性IgE的影响59
• 3 雷公藤多苷对过敏性哮喘挪威褐鼠肺、肝和肾组织的影响59-61
• 4 雷公藤多苷对过敏性哮喘挪威褐鼠肝和肾血生化指标的影响61-62
• 5 雷公藤多苷对过敏性哮喘挪威褐鼠哮喘相关基因表达的影响62-63
• 讨论63-66
• 小结66-67
• 全文总结67-68
• 参考文献68-72
• 缩略词表72-74
• 个人简历及发表文章74-75
• 致谢75-76

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本文编号：697650