噬菌体治疗耐药性鲍曼不动杆菌肺炎的实验研究

发布时间：2017-08-21 01:12

  本文关键词：噬菌体治疗耐药性鲍曼不动杆菌肺炎的实验研究

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【摘要】：【目的】以鲍曼不动杆菌为代表的非发酵菌成为21世纪院内感染的主要致病菌,由于日益严重的耐药形势,人类已接近无药可用的境地。近年已有百年历史的噬菌体治疗再次引起广泛关注,希望从中寻求克服细菌耐药的新途径。本研究我们将采用前期筛选的、生物学信息明确、已进行全基因组测序并在Genbank上注册的噬菌体IME-AB2,治疗多重耐药鲍曼不动杆菌小鼠肺炎,系统评价该株噬菌体用于体内治疗的有效性和安全性。研究结果将为耐药性鲍曼不动杆菌的治疗提供新思路和实验基础,研究方法将为噬菌体的个体化治疗提供技术支持。【方法】按照文献报道环磷酰胺300 mg/kg腹腔注射预处理BALB/c小鼠,根据最小致死量确定鲍曼不动杆菌的致伤剂量2×108CFU/m L,滴鼻法构建小鼠肺炎模型;治疗组给予噬菌体滴鼻治疗,PBS滴鼻作为对照。采用小鼠生存分析、肺部Micro-CT、肺脏组织病理学等指标评价治疗效果,同时进行噬菌体治疗的剂量效果分析和时间效果分析;分析比较小鼠肺脏组织中细菌和噬菌体计数的动态变化探讨治疗机制;观察小鼠临床症状评分、脾脏和肝脏病理学改变、滴定小鼠血液中的噬菌体抗体,进行安全性评价。【结果】根据临床症状评分和肺部Micro-CT观察,本研究成功构建了多重耐药鲍曼不动杆菌肺炎的小鼠模型。小鼠致伤后1 h给予感染复数MOI=10的噬菌体剂量治疗,小鼠全部存活,PBS对照组小鼠在感染后60-144小时内全部死亡,半数小鼠在83小时内死亡,两组比较P0.001。小鼠致伤后1 h分别采用感染复数为MOI=10、1和0.1剂量的噬菌体进行治疗,240 h的存活率分别是100%、70%和20%;将治疗剂量固定为MOI=10,分别在致伤后1、4和24h给与治疗生存率分别为100%,60%,20%,显示了噬菌体治疗良好的剂量依赖性和时间依赖性。肺部Micro-CT显示试验组小鼠的肺部浸润不仅范围小而且程度轻。肺脏组织病理学显示对照组小鼠肺部组织出血、水肿及白细胞浸润明显加重,并可见大范围实变。2-144 h观察期内的各个时间点,治疗组肺组织匀浆中细菌计数均明显低于对照组,并且呈进行性下降,随着细菌计数的下降噬菌体数量也呈下降趋势。以症状分值评价实验小鼠的一般状况,治疗组在前期也呈下降趋势,但36小时后逐渐好转直至痊愈,而对照组则持续恶化直至死亡,两组比较P0.001。环磷酰胺腹腔注射后小鼠脾脏明显缩小,噬菌体治疗可使缩小的脾脏复原甚至更大,噬菌体治疗216 h后可以检测到噬菌体中和抗体。【结论】噬菌体IME-AB2对多种耐药鲍曼不动杆菌引起的肺炎小鼠具有良好的治疗效果,且安全性良好,值得进一步研究开发。噬菌体具有免疫原性,静脉注射和多次给药的使用策略有待进一步研究。
【关键词】：噬菌体 鲍曼不动杆菌 肺炎 小鼠模型
【学位授予单位】：中国人民解放军军事医学科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R563.1
【目录】：

• 缩略词表4-5
• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 第一章 前言8-9
• 第二章 实验方法9-13
• 2.1 菌液制备9-10
• 2.1.1 鲍曼不动杆菌裂解性噬菌体IME-AB2的扩大培养9
• 2.1.2 鲍曼不动杆菌裂解性噬菌体IME-AB2的浓缩及纯化9
• 2.1.3 鲍曼不动杆菌裂解性噬菌体IME-AB2滴度测定9-10
• 2.2 鲍曼不动杆菌致小鼠肺炎模型的建立10
• 2.2.1 小鼠免疫抑制的处理10
• 2.2.2 鲍曼不动杆菌小鼠肺部感染最小给菌剂量的确立10
• 2.3 噬菌体治疗的最佳时间与剂量实验10-11
• 2.3.1 噬菌体最佳治疗剂量的确立10-11
• 2.3.2 噬菌体最佳治疗时间的确立11
• 2.4 噬菌体治疗小鼠鲍曼不动杆菌肺炎效果评价11-12
• 2.4.1 分组及处理方案11
• 2.4.2 小鼠肺部组织中细菌和噬菌体数量变化11-12
• 2.4.3 小鼠脏器组织病理学观察12
• 2.5 噬菌体治疗后血清中抗噬菌体抗体研究12
• 2.6 统计学方法12-13
• 第三章 实验结果13-23
• 3.1 免疫抑制小鼠肺炎模型的建立13
• 3.2 鲍曼不动杆菌致死剂量的确定13
• 3.3 噬菌体治疗的剂量和时间依赖性13-14
• 3.4 噬菌体治疗小鼠生存曲线分析和临床效果评价14-16
• 3.5 噬菌体治疗后小鼠肺内细菌和噬菌体的动态变化分析16-17
• 3.6 实验小鼠肺、肝及脾脏组织病理学检查17-18
• 3.7 实验小鼠的微型电子计算机断层扫描仪观察18-19
• 3.8 噬菌体治疗后小鼠脾脏重量变化19-20
• 3.9 滴鼻感染噬菌体小鼠血清中抗噬菌体抗体的检测20-21
• 3.10 实验小鼠肺和血清中炎症因子检测21-23
• 第四章 讨论23-25
• 第五章 研究结论25-26
• 参考文献26-28
• 附件28-30
• 个人简历30-31
• 致谢31

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