香烟烟雾对大鼠肺组织及Ⅱ型肺泡上皮细胞亲环素A表达的影响

发布时间：2017-09-13 02:23

  本文关键词：香烟烟雾对大鼠肺组织及Ⅱ型肺泡上皮细胞亲环素A表达的影响

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【摘要】：【目的】 初步研究亲环素A(CyclophilinA,CypA)在被动吸烟大鼠肺组织中的表达；以及在香烟烟雾提取物处理的大鼠II型肺泡上皮细胞（AECII）内的表达及其与内质网应激性凋亡（ERSIA）的关系。 【方法】 本研究分为动物实验部分以及体外细胞实验部分： 1.动物实验部分：40只SD-大鼠分为对照组、被动吸烟2个月组（2个月组）、被动吸烟4个月组（4个月组）、被动吸烟4个月后停止吸烟1个月组（戒烟组），检测各组大鼠肺功能，提取各组大鼠肺组织标本，用HE染色法检测造模情况，分别采用反转录-PCR（RT-PCR）、Western blot、免疫组织化学（IHC）方法检测CypA的表达。 2.体外细胞实验部分：体外培养AECII；制备10%的CSE；用CSE分别处理AECII0h、3h、6h、12h、24h；采用RT-PCR、Western blot、细胞免疫荧光染色方法检测CypA、Caspase12、JNK、P-JNK、CHOP的表达。 【结果】 1.动物实验部分 （1）大鼠肺组织病理学结果显示:2个月组与对照组相比肺泡腔有所扩大，肺泡结构破坏，肺泡间质有断裂，4个月组肺泡腔扩大更明显，肺泡壁变薄，肺泡结构严重断裂，戒烟组与4个月组差异不明显。 （2）Western blot结果显示：CypA在对照组、吸烟2个月组、4个月组、戒烟组的蛋白表达量分别为：0.63±0.02、1.02±0.27、1.32±0.16、0.84±0.01。吸烟4个月组大鼠肺组织中表达最高，其次是吸烟2个月组、戒烟组，表达最低的为正常对照组大鼠肺组织。RT-PCR、IHC结果与Western blot结果一致。 2.细胞实验部分 （1）RT-PCR结果显示：CypA在0h、3h、6h、12h、24h的mRNA表达量分别为：0.64±0.24、0.86±0.01、0.88±0.09、1.11±0.09、1.02±0.01。随着CSE作用时间的延长，CypA的表达呈现一个递增的趋势，在12H表达最高。 （2）Westernblot结果显示:CypA在0h、3h、6h、12h、24h的蛋白表达量分别为：0.08±0.02、0.15±0.03、0.24±0.03、0.31±0.02、0.46±0.03。随着CSE作用时间延长CypA蛋白的表达呈现递增趋势，于24H表达最高。总JNK、P-JNK、Caspase12、CHOP在0h、3h、6h、12h、24h的蛋白表达量分别为1.52±0.22、1.13±0.24、1.50±0.21、1.21±0.55、1.04±0.24；0.16±0.05、0.29±0.03、0.38±0.03、0.48±0.06、0.69±0.01；0.12±0.05、0.25±0.04、0.39±0.02、0.58±0.05、0.49±0.02；0.00、0.35±0.09、0.48±0.04、0.66±0.06、0.81±0.08。在总JNK的表达与对照组相比，10％的CSE作用不同时间点均无显著差异（P＞0.5），，P-JNK的表达随着CSE作用时间的延长呈递增趋势。Caspase12的表达随着CSE暴露时间的延长不断增加。CHOP蛋白的表达随着CSE暴露时间的延长也呈现递增趋势。 【结论】 被动吸烟大鼠肺组织CypA表达增高，香烟烟雾提取物处理RLE-6TN上调CypA表达水平并激活ERSIA相关通路。研究结果提示CypA对香烟烟雾（提取物）诱导的ERS可能具有保护作用。
【关键词】：内质网应激 细胞凋亡 亲环素A 慢性阻塞性肺疾病 香烟烟雾
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R563.9
【目录】：

• 主要缩略词简表4-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-12
• 材料与方法12-19
• 结果19-23
• 讨论23-26
• 结论26-27
• 参考文献27-30
• 附图30-34
• 综述：亲环素 A 在呼吸系统疾病中的研究进展34-44
• 参考文献40-44
• 硕士期间撰写论文44-45
• 致谢45

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本文编号：840958