尘螨疫苗治疗对呼吸道天然免疫调节机制的研究

发布时间：2017-09-14 03:43

  本文关键词：尘螨疫苗治疗对呼吸道天然免疫调节机制的研究

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【摘要】：目的:研究表明支气管哮喘削弱肺部天然免疫,增加感染和定植风险,尘螨疫苗特异性免疫治疗对哮喘有较好的疗效,而尘螨疫苗对肺部天然免疫的影响目前未见报道,因此本实验研究尘螨疫苗对哮喘宿主抗感染能力的影响,并探讨其可能的起效机制。方法:1.动物实验:①4-6周龄SPF级雌性Balb/c小鼠随机分为PBS对照组、哮喘组和尘螨疫苗治疗组。哮喘组和治疗组通过3次腹腔注射致敏和7次滴鼻激发建立哮喘模型,治疗组激发前进行皮下免疫治疗8次干预,对照组全程同步作PBS对照处理。末次激发24h后,测定小鼠气道反应性,肺泡灌洗液细胞分类计数,肺组织病理学检查,ELISA法测血清中抗原特异性Ig E、IgG1和IgG2a水平。②4-6周龄SPF级雌性Balb/c小鼠随机分为PBS对照组、感染组、哮喘感染组和尘螨疫苗感染组。哮喘感染组和尘螨疫苗感染组通过3次腹腔注射致敏和7次滴鼻激发建立哮喘模型,尘螨疫苗感染组激发前进行皮下免疫治疗8次干预,感染组用PBS代替致敏、治疗和激发,感染组、哮喘感染组和尘螨疫苗感染组在末次激发后24h滴鼻感染绿脓杆菌,对照组全程同步作PBS对照处理。感染24h后测定小鼠肛温,肺泡灌洗液中细胞分类计数和细菌含量观察,肺组织病理学检查,肺匀浆涂板测定细菌负荷量。③4-6周龄SPF级雌性Balb/c小鼠随机分为PBS对照组、哮喘组和尘螨疫苗治疗组。哮喘组和治疗组通过3次腹腔注射致敏和7次滴鼻激发建立哮喘模型,治疗组激发前进行皮下免疫治疗8次干预,对照组全程同步作pbs对照处理。末次激发24h后elisa法测定小鼠肺泡灌洗液中抗菌肽cramp(cathelicidinrelatedantimicrobialpeptide)水平,免疫荧光法和实时荧光定量pcr法检测肺组织中cramp蛋白和基因表达,elisa法检测肺泡灌洗液中il-4、ifn-γ、il-10和tgf-β1浓度,免疫组织化学法检测cyp27b1表达。2.细胞实验:①空白培养基、25(oh)2vd3、tgf-β1+25(oh)2vd3、ifn-γ+25(oh)2vd3、il-10+25(oh)2vd3、tgf-β1、ifn-γ、il-10和1,25(oh)2vd3刺激人支气管上皮细胞后,实时荧光定量pcr法测人抗菌肽camp(cathelicidinantimicrobialpeptide)表达。②不同浓度tgf-β1刺激人支气管上皮细胞后,实时荧光定量pcr和免疫印迹法检测cyp27b1蛋白和基因表达。③itra预处理后,经25(oh)2vd3、tgf-β1+25(oh)2vd3和tgf-β1刺激人支气管上皮细胞,免疫印迹法和实时荧光定量pcr检测人抗菌肽camp蛋白和基因表达。④itra预处理后,经25(oh)2vd3、tgf-β1+25(oh)2vd3和tgf-β1刺激人支气管上皮细胞,再绿脓杆菌感染细胞,细胞匀浆涂板测定细胞内细菌含量。结果:1.动物实验:①尘螨疫苗治疗后小鼠penh值明显低于哮喘组(p0.01),肺泡灌洗液中各炎性细胞均减少(均p0.01),血清中特异性ige和igg1比哮喘组降低(均p0.01),igg2a高于哮喘组(p0.01),肺组织气道炎症减轻。②经尘螨疫苗治疗的小鼠肛温低于哮喘感染组(p0.01),肺泡灌洗液中各炎性细胞均减少(均p0.01),肺组织中和肺泡灌洗液中的细菌负荷均减少(均p0.01),肺组织感染病变减轻。③尘螨疫苗治疗后小鼠肺泡灌洗液中cramp含量增加(p0.01),肺组织中cramp的mrna(p0.01)和蛋白(p0.01)表达均升高,肺泡灌洗液中IFN-γ、TGF-β1和IL-10表达增高(均P0.01),IL-4表达降低(P0.01),肺组织中CYP27b1表达增加。2.细胞实验:①TGF-β1+25(OH)2 VD3组、25(OH)2 VD3组和1,25(OH)2 VD3组细胞CAMP mRNA表达上调(均P0.01),且TGF-β1+25(OH)2 VD3组比25(OH)2 VD3组更高(P0.05)。②浓度为0.1ng/ml、1ng/ml和10ng/ml的TGF-β1增加人支气管上皮细胞CYP27b1蛋白和mRNA的表达(均P0.01)。③ITRA降低TGF-β1+25(OH)2 VD3对CAMP蛋白和mRNA的上调作用(均P0.01)。④TGF-β1+25(OH)2 VD3(P0.01)和25(OH)2 VD3(P0.05)减少细胞内入侵的细菌数,并且TGF-β1+25(OH)2 VD3组比25(OH)2 VD3组(P0.05)菌落数更少,而ITRA抑制了TGF-β1+25(OH)2 VD3的作用(P0.01)。结论:尘螨疫苗能有效减轻尘螨诱导的过敏性哮喘,并同时能通过上调抗菌肽Cathelicidin表达增强哮喘小鼠肺部抗菌能力,这可能是通过上调TGF-β1而增加CYP27b1的表达间接升高Cathelicidin在呼吸道的表达,从而增强肺部抵抗微生物的天然免疫应答。
【关键词】：哮喘 尘螨疫苗特异性免疫治疗 天然免疫 Cathelicidin TGF-β1
【学位授予单位】：四川医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R562.25
【目录】：

• 摘要5-8
• Abstract8-12
• 前言12-15
• 材料与方法15-34
• 1 实验器材与仪器15
• 2 主要实验试剂15-18
• 3 主要溶液配制18
• 4 主要实验仪器18-19
• 5 试验方法19-33
• 6 统计学处理33-34
• 结果34-41
• (1)尘螨疫苗减轻尘螨诱导的小鼠哮喘34-35
• (2)尘螨疫苗减轻哮喘小鼠肺部绿脓杆菌感染35-37
• (3)尘螨疫苗上调哮喘小鼠呼吸道CRAMP表达37-38
• (4) TGF-β1增加CYP27b1表达而增高HBE细胞表达CAMP38-40
• (5)尘螨疫苗上调哮喘小鼠肺部CYP27b1蛋白表达40-41
• 附：图表41-55
• 讨论55-61
• 结论61-62
• 参考文献62-66
• 英汉缩略词对照表66-68
• 致谢68-69
• 综述69-79
• 参考文献75-79

【共引文献】

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2 张东玲;关瑞章;;鱼类Cathelicidin抗菌肽的研究进展[J];集美大学学报(自然科学版);2013年06期

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本文编号：847693