大容量肺灌洗对家兔肺泡上皮屏障和水通道蛋白1表达的影响

发布时间：2017-09-19 13:06

  本文关键词：大容量肺灌洗对家兔肺泡上皮屏障和水通道蛋白1表达的影响

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【摘要】：目的：以家兔为研究对象，模拟临床大容量肺灌洗(whole lung lavage,WLL)方法对家兔进行肺灌洗，观察肺灌洗对肺泡上皮屏障和水通道蛋白1(AQP1)表达的影响，灌洗液中加入β2受体激动剂能否促进WLL术后肺泡内残留灌洗液的清除。方法：将15只家兔随机分为对照组、肺灌洗组、灌洗+β2受体激动剂组(β2受体组)，每组5只。对照组：将家兔在全麻状态下行气管切开婴儿气管导管插管，分隔左右肺，右肺自主呼吸，左肺不做灌洗。肺灌洗组：模拟临床WLL方法将家兔在全麻状态下气管切开行气管导管插管，，分隔左右肺，右肺自主呼吸，左肺用37℃生理盐水灌洗，每次灌入10mL/kg，每次灌注时间1～2分钟，引流2～3分钟，连续灌洗10次，灌洗液回收率在90%以上。β2受体组：WLL方法同肺灌洗组，但在灌洗液中加入浓度为0.05mg/kg β2受体激动剂特布它林，三组吸氧浓度均为21%。三组于灌洗前取股动脉血行血气分析，灌洗后10min再次取股动脉血行血气分析，放血处死家兔取肺灌洗侧组织行苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织形态学的改变，采用病理评分法评价各组家兔肺组织的病理改变；电子显微镜观察肺泡上皮屏障超微结构的改变；免疫组织化学染色(SP法)检测肺组织中AQP1蛋白的表达，以平均光密度值(OD值)表示AQP1相对表达量；实时荧光定量PCR法检测AQP1mRNA的表达，以SYBR-green I作荧光指示剂，检测AQP1mRNA的量，采用双ΔΔCt法计算各组目的基因的相对表达量。所得数据采用SPSS17.0软件进行统计学处理，各组计量资料采用均数±标准差(x±s)表示，组间差异显著性检验采用单因素方差分析和q检验，两组间比较采用SNK法检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。结果：(1)血气分析：灌洗前对照组(PaO266.20±3.12,氧合指数295.62±14.87)、肺灌洗组(PaO265.40±4.84,氧合指数311.43±23.06)、β2受体组(PaO269.10±12.43,氧合指数329.05±59.20) PaO2及氧合指数三组比较差异无统计学意义(P＞0.05)；大容量肺灌洗后10min家兔的动脉血气分析示：灌洗组(PaO248.98±4.01,氧合指数233.24±19.09)明显低于对照组(PaO259.22±2.70，氧合指数282.00±12.84)，差异有统计学意义(P＜0.05)；β2受体组(PaO253.46±5.63,氧合指数254.57±26.83)也低于对照组，但差异无统计学意义(P＞0.05)。(2)肺组织湿/干重比(W/D)：灌洗后肺组织的W/D灌洗组(3.62±0.14)和β2受体组(3.42±0.10)明显高于对照组(3.20±0.17)，差异均有统计学意义(P均＜0.05)；但β2受体组W/D低于灌洗组，差异有统计学意义(P＜0.05)。(3)肺组织的大体表现：灌洗组和β2受体组家兔肺脏均有不同程度的肿胀，且下肺较明显，质量增加，切面可见淡红色泡沫样液体溢出；对照组肺组织弹性好，外观正常，无上述改变。(4)HE染色：对照组肺组织肺泡腔内未见水肿液，无肺泡受损及黏膜水肿改变；肺灌洗组和β2受体组家兔肺泡腔和肺间质内有淡红色的水肿液，肺泡腔扩大。病理评分：灌洗组(7.2±1.483)和β2受体组(5.2±1.095)高于对照组(0.8±0.837)，差异有统计学意义(P＜0.05)；但β2受体组低于灌洗组，差异有统计学意义(P＜0.05)。(5)电镜：对照组肺组织肺泡上皮细胞间结构完整，紧密连接未见破坏；肺灌洗组和β2受体组家兔肺组织肺泡上皮细胞间紧密连接有破坏。(6)免疫组织化学：对照组AQP1表达于支气管和肺泡周围的毛细血管内皮及肺泡上皮细胞，呈棕黄色染色提示AQP1表达阳性；灌洗组和β2受体组肺泡上皮细胞AQP1表达均较对照组增强，β2受体组表达增强更明显。肺灌洗组和β2受体组AQP1表达的OD值分别为(0.504±0.075)、(0.652±0.041)，较对照组(0.354±0.014)明显增高，差异有统计学意义(P＜0.05)；与肺灌洗组比较，β2受体组AQP1表达的OD值增高，差异有统计学意义(P＜0.05)。(7)实时荧光定量PCR：灌洗组和β2受体组AQP1mRNA相对表达量分别为(3.07±0.75)、(4.74±1.14)，明显高于对照组(1.90±1.09)，差异具有统计学意义(P＜0.05)；与灌洗组比较，β2受体组AQP1mRNA相对表达量增加，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论：(1)大容量肺灌洗后家兔存在一定程度的肺损伤。(2)大容量肺灌洗导致家兔肺组织AQP1表达增加。(3) β2受体激动剂能上调AQP1的表达，减轻肺泡上皮损伤，促进肺泡内残留灌洗液的转运，其上调AQP1的表达可能是其促进肺泡内液体转运的机制之一。
【关键词】：大容量肺灌洗 肺损伤 水通道蛋白1 紧密连接
【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R563.9
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 前言11-13
• 材料与方法13-23
• 1 实验动物13
• 2 主要实验试剂13
• 3 主要实验仪器13-14
• 4 溶液配制14-15
• 5 实验方法15-22
• 6 统计学处理22-23
• 结果23-30
• 1 各组家兔动脉血气分析结果23-24
• 2 肺组织湿/干重比值（W/D）24
• 3 肺组织大体形态观察24-25
• 4 HE 染色观察肺组织形态25-26
• 5 肺组织超微结构26
• 6 家兔肺组织免疫组化染色结果26-28
• 7 实时定量 PCR 检测家兔肺组织 AQP1 的表达28-30
• 讨论30-36
• 1 大容量肺灌洗术的临床应用30-31
• 2 大容量肺灌洗对肺泡上皮屏障结构及紧密连接的影响31-33
• 3 大容量肺灌洗对肺泡上皮 AQP1 表达的影响33-34
• 4 β_2受体激动剂在大容量肺灌洗中的作用34-36
• 结论36-37
• 参考文献37-43
• 英汉缩略词对照表43-44
• 致谢44-45
• 综述45-55
• 参考文献51-55

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 李永强;熊玮;戴晓天;;大容量肺灌洗术治疗尘肺病的发展及应用[J];重庆医学;2011年33期

2 秦孝发;支气管肺泡灌洗及其在尘肺研究中的应用[J];国外医学.卫生学分册;1994年01期

3 袁扬;黄京慧;陈刚;马国宣;;大容量全肺灌洗治疗尘肺病术中肺顺应性的变化[J];工业卫生与职业病;2009年05期

本文编号：881806