CBD-VEGF对博来霉素诱导小鼠肺纤维化的影响及其机制研究

发布时间：2017-09-23 06:29

  本文关键词：CBD-VEGF对博来霉素诱导小鼠肺纤维化的影响及其机制研究

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【摘要】：目的： 研究胶原结合基-血管内皮生长因子(collagen binding domain-vascular endothelialgrowth factor, CBD-VEGF)对博来霉素（bleomycin, BLM）致小鼠肺纤维化的干预作用，并探讨其可能的作用机制。 方法： 1.小鼠肺纤维化模型的构建：C57BL/6小鼠随机分为假手术组和肺纤维化模型组，模型组小鼠经气管内一次性滴注BLM建立肺纤维化模型，于造模后第2、4、16周处死小鼠，HE、MASSON染色进行组织病理学观察，采用Ashcroft评分评价肺纤维化严重程度，同时免疫组织化学染色检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原（COL-Ⅰ）及转化生长因子-β1（TGF-β1）的表达水平，采用半定量评分进行比较。 2. CBD-VEGF对BLM致小鼠肺纤维化的干预：C57BL/6小鼠随机分为假手术组、BLM+NS组、BLM+VEGF组。小鼠经气管内一次性滴注BLM建立肺纤维化模型，BLM+VEGF组小鼠在造模后立即气管内滴注带有His-tag的CBD-VEGF（2ug/100ul/只），假手术组、BLM+NS组小鼠滴注等体积生理盐水。BLM+NS组、BLM+VEGF组部分小鼠在干预6小时后处死，免疫组织化学染色检测His-tag表达水平；其余小鼠分别于干预后第2、4、16周处死，第4、16周处死前行肺功能检测；HE、MASSON染色进行组织病理学观察，Ashcroft评分评价肺纤维化严重程度；免疫组织化学染色检测TGF-β1、α-SMA及COL-Ⅰ的表达水平，采用半定量评分进行评价；CD31染色进行微血管计数（MVD）。 结果： 与假手术组相比，模型组HE、MASSON染色示肺内结构破坏，胶原蛋白沉积，Ashcroft评分显著增高（P0.001）；免疫组化显示，肺组织内α-SMA和COL-Ⅰ染色面积和染色强度均明显增强，半定量评分具有统计学差异（P0.001，P0.01）；TGF-β1表达水平在第2、4周时显著升高（P0.05），第16周时，表达水平呈下降趋势，与假手术组无显著性区别。模型组内比较，2、4、16周三个时间点Ashcroft评分及COL-Ⅰ表达水平无显著差异；16周时α-SMA较4周时出现显著下降。 与BLM+NS组相比，CBD-VEGF干预6小时后免疫组化显示，BLM+VEGF组肺内His-tag染色呈强阳性，半定量评分具有极其显著差异（P0.001），提示CBD-VEGF在肺内广泛分布；HE、MASSON染色示第2周时BLM+VEGF组肺内结构破坏更严重，胶原蛋白沉积更明显，Ashcroft评分显著增加（P0.05），第4、16周时则无明显区别；肺功能检测，第4、16周时BLM+VEGF组肺静态顺应性均未出现好转；免疫组化检测示，CBD-VEGF可以促进第2周时的TGF-β1、α-SMA和第4周时的COL-Ⅰ的表达，半定量评分具有显著差异（P0.01，P0.01，P0.01）；MVD示，CBD-VEGF能够促进肺内微血管生成，在第16周时，出现极其显著的统计学差异（P0.001）。 BLM+VEGF组内比较：4、16周小鼠Ashcroft评分及TGF-β1表达较2周时显著下降，16周时α-SMA及COL-Ⅰ表达水平均较2周时显著下降。 结论： 一次性气管内滴注BLM可成功构建小鼠肺纤维化模型，形成的纤维化可持续存在，至16周时未观察到明显的自愈性。CBD-VEGF可以通过气管滴注的方式到达肺部，，在纤维化早期通过促进TGF-β1、α-SMA表达，刺激胶原蛋白沉积，加重肺纤维化。但CBD-VEGF又能够促进肺内血管生成，随着作用时间的延长，其是否对纤维化具有一定的修复作用尚待进一步研究。
【关键词】：CBD-VEGF 博来霉素 肺纤维化 血管生成
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R563
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 前言10-14
• 第一部分 博来霉素诱导小鼠肺纤维化模型的构建和评估14-27
• 材料与方法14-16
• 结果16-24
• 讨论24-27
• 第二部分 CBD-VEGF 对博来霉素诱导小鼠肺纤维化的干预作用27-47
• 材料与方法27-29
• 结果29-42
• 讨论42-47
• 结论47-48
• 本文的创新点48-49
• 参考文献49-61
• 综述61-72
• 参考文献67-72
• 中英文缩略词表72-73
• 攻读硕士学位期间发表论文73-74
• 致谢74-75

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

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本文编号：903773