Thy-1 DNA甲基化在煤尘致肺纤维化中的作用研究
本文关键词：Thy-1 DNA甲基化在煤尘致肺纤维化中的作用研究
更多相关文章： 煤尘 矽尘 单核细胞源巨噬细胞 人胚肺成纤维细胞 纤维化 DNA甲基化
【摘要】：目的:采用体外实验方法,通过间接培养方式,分别观察煤尘、矽尘通过THP-1单核细胞源巨噬细胞致人胚肺成纤维细胞(MRC-5)中纤维化相关基因COL-I、COL-III、a-SMA表达变化,Thy-1 mRNA表达及其DNA甲基化的变化、DNA甲基化相关基因DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的表达变化,观察煤尘、矽尘致人胚肺成纤维细胞纤维化改变中Thy-1是否发生DNA甲基化。方法:采用四唑盐2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐(CCK-8)比色法确定煤尘液和矽尘工作液分别染毒单核细胞源巨噬细胞浓度;用含500nmol/L佛波酯(PMA)的1640培养液培养THP-1单核细胞,24h诱导分化后成单核细胞源巨噬细胞,分别收集100μg/mL煤尘工作液染毒巨噬细胞24h的培养上清液和100μg/mL矽尘工作液染毒后培养上清液,进而刺激人胚肺成纤维细胞24h、48h、72h,分别进行以下实验:1.酶联免疫分析(ELISA)法测定巨噬细胞中IL-6、TGF-b1蛋白含量和人胚肺成纤维细胞中TGF-b1、COL-I、COL-III、a-SMA蛋白含量;2.实时荧光定量PCR法检测人胚肺成纤维细胞中COL-I、COL-III、a-SMA、Thy-1、DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRNA的表达;3.巢式降落式甲基化特异性PCR(nM-PCR)法检测Thy-1 DNA甲基化。结果(1)不同浓度煤尘、矽尘工作液(0、25、50、100、150、200μg/mL)染毒单核细胞源性巨噬细胞,在150、200μg/mL剂量组与对照组比较,细胞增殖活性明显降低,呈现剂量依赖关系,差异有显著性(P㩳0.05)。(2)煤尘、矽尘工作液(100μg/mL)染毒巨噬细胞后,IL-6、TGF-b1表达升高,与对照组比较,有显著性差异(P㩳0.05)。(3)煤尘、矽尘工作液染毒巨噬细胞后上清液刺激人胚肺成纤维细胞24h,48h和72h,TGF-b1、COL-I、COL-III、a-SMA mRNA和蛋白表达均明显高于对照组,并且随着染毒时间增加,表达逐渐升高,呈现时间效应关系(R0.05)。(4)煤尘、矽尘工作液染毒巨噬细胞后上清液刺激人胚肺成纤维细胞24h,48h和72h Thy-1mRNA表达逐渐降低,呈现时间效应关系(P㩳0.05)。(5)煤尘、矽尘工作液染毒巨噬细胞后上清液刺激人胚肺成纤维细胞24h,48h和72h Thy-1DNA甲基化水平逐渐升高,与对照组比较,有显著性意义(P㩳0.05)。(6)煤尘、矽尘工作液染毒巨噬细胞后上清液刺激人胚肺成纤维细胞24h,48h和72hDNMT1、3a、3b表达逐渐升高(P㩳0.05),其中煤尘组24h DNMT3a,矽尘组48h DNMT3b mRNA表达与对照组比较降低,无显著性意义。结论(1)煤尘、矽尘可促使巨噬细胞中IL-6和TGF-b1表达升高,发生炎性改变。(2)通过间接培养方式,巨噬细胞上清中炎性因子的作用下导致MRC-5细胞中TGF-b1表达异常。(3)MRC-5细胞中TGF-b1表达异常可促进MRC-5细胞纤维化改变。(4)在MRC-5细胞纤维化改变的过程中,Thy-1表达逐渐降低。(5)在DNA甲基化转移酶的作用下,Thy-1DNA序列发生甲基化。
【关键词】：煤尘 矽尘 单核细胞源巨噬细胞 人胚肺成纤维细胞 纤维化 DNA甲基化
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R135.2
【目录】：
- 摘要4-6
- ABSTRACT6-8
- 中英文缩略词表8-11
- 前言11-14
- 材料与方法14-27
- 结果27-38
- 讨论38-42
- 结论42-43
- 参考文献43-49
- 综述49-57
- 综述参考文献54-57
- 致谢57-58
- 攻读硕士期间发表的论文58-59
- 个人简介59
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 ;江西省人民委员会批转省劳动局、卫生厅、总工会、冶金厅“关于防止矽尘危害工作的情况和今后工作意见的报告”[J];江西政报;1963年05期
2 霍洪丽,周玮;吉铁分局采石场矽尘作业基本情况[J];铁道劳动安全卫生与环保;2000年01期
3 阎跃进,陶宁,田菊鸽,吴灿泽;地质勘探工人历年接触矽尘的评价[J];中华预防医学杂志;2001年05期
4 邢宝林;矽尘作业人员1340名高血压调查分析[J];职业与健康;2002年10期
5 林春芳;刘秉慈;李涛;范雪云;高艾;贾效伟;;我国矽尘防治中对矽尘表面性质重视的必要性[J];中华劳动卫生职业病杂志;2006年05期
6 毋小玉;金国平;焦洁;孙世义;姚武;张欢;冯斐斐;;矽尘作业工人脂质代谢水平测定分析[J];河南医学研究;2007年03期
7 夏沈宁;;接触矽尘作业工人心电图异常改变的调查分析[J];中外医疗;2009年03期
8 崔常安,张照寰,王昌玲,张如玉,胡明玉,■文■;接触矽尘工人的肺功能研究[J];重庆医药;1979年06期
9 本刊编辑部;进一步做好防治矽尘危害工作[J];冶金劳动卫生;1980年04期
10 龚梓初;矽尘与肺癌[J];劳动医学;1985年04期
中国重要会议论文全文数据库 前6条
1 胡永斌;梁冠男;周建华;;矽尘诱导人支气管上皮细胞上皮—间质转型[A];中华医学会病理学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
2 刘伟;陈娟娟;魏茂提;王世鑫;;染矽尘大鼠早期肺组织蛋白质双向电泳图谱差异分析[A];天津市生物医学工程学会第29届学术年会暨首届生物医学工程前沿科学研讨会论文集[C];2009年
3 张玮;王瑞;刘天敏;周效宝;王辉;张海东;刘正亮;;染矽尘大鼠支气管肺泡灌洗液中细胞因子变化的研究[A];中国职业安全健康协会2013年学术年会论文集[C];2013年
4 张海鹏;王瑞;王辉;张玮;;染矽尘大鼠克拉拉细胞蛋白和表面活性蛋白D表达变化的研究[A];中国职业安全健康协会2013年学术年会论文集[C];2013年
5 闫立成;姚林;王学生;张峻;李清钊;张艳淑;;不同剂量矽尘染毒对实验大鼠体内SP-D含量的影响[A];全国生化/工业与卫生毒理学学术会议论文集[C];2010年
6 马小兵;廖唐东;孙树勋;;矽尘对人巨噬细胞MMP-9及TIMP-1表达的体外研究[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年
中国重要报纸全文数据库 前2条
1 周前进邋胡修德 阳琳;华中科大同济医学院矽肺研究通过省级鉴定[N];中国医药报;2007年
2 记者 赵凤华邋通讯员 周前进;我国矽肺研究成果得到国际重视和应用[N];科技日报;2007年
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 刘跃伟;矽尘长期暴露人群死亡率的队列研究[D];华中科技大学;2011年
2 王世鑫;二氧化硅粉尘致肺纤维化机制及早期生物标记物研究[D];重庆大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张志敏;Prxs在矽尘致肺纤维化中的作用及槲皮素的干预研究[D];河北联合大学;2014年
2 赵晨阳;建筑施工扬尘监测与危害程度评价研究[D];首都经济贸易大学;2015年
3 祝云芳;某铁矿接矽尘作业人员体内硅元素、CC16及TNF-α水平变化的研究[D];华北理工大学;2015年
4 骆辰;MMP-3在矽尘诱导的小鼠肺纤维化中高表达及其作用机制的初步研究[D];南京医科大学;2014年
5 燕玲;染矽尘大鼠肺泡上皮细胞诱导骨髓间充质干细胞分化的研究[D];贵州医科大学;2016年
6 王晓艳;PI3K/mTOR通路在染矽尘肺泡巨噬细胞自噬中的作用研究[D];华北理工大学;2016年
7 魏丛慧;Thy-1 DNA甲基化在煤尘致肺纤维化中的作用研究[D];宁夏医科大学;2016年
8 雷鹏;抑制性寡脱氧核苷酸对染矽尘小鼠早期炎症的影响及其机制探讨[D];重庆医科大学;2013年
9 黄何;染矽尘大鼠支气管肺泡灌洗液细胞与蛋白成分分析[D];华北煤炭医学院;2009年
10 陈蕾;染矽尘大鼠早期肺组织差异基因表达谱及手掌参醇提取物对其影响的研究[D];重庆医科大学;2008年
，本文编号：915684
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/huxijib/915684.html
