miR-21-5p拮抗肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的分子机制

发布时间：2017-09-25 14:06

  本文关键词：miR-21-5p拮抗肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的分子机制

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【摘要】：目的：观察miR-21-5p对过氧化氢（H2O2）诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞(TypeⅡalveolarepithelial cell,AEC-Ⅱ)凋亡的影响，探索其抗凋亡的分子机制。 方法：AEC-Ⅱ传代培养分为正常对照组，H2O2损伤组（0.5mmol/L H2O2损伤后继续培养），miR-21-5p腺病毒过表达组（miR-21-5p腺病毒载体转染AEC-Ⅱ，转染成功后，0.5mmol/L H2O2诱导凋亡模型），miR-21-5p阴性转染组（不含miR-21-5p的腺病毒转染AEC-Ⅱ，转染成功后，0.5mmol/L H2O2诱导凋亡模型）；透射电子显微镜(transmitting electron microscopy,TEM)检测细胞凋亡形态；于转染48h用Taq Man实时荧光定量RT—PCR检测各组AEC-Ⅱ的miR-21-5p表达水平；流式细胞术(FlowCytometry，FCM)于转染6h、12h、24h、48h检测各组细胞早期凋亡率；Western blot检测每组Bcl-2，Bax，caspase-3三种蛋白的表达水平。 结果：(1) AEC-Ⅱ鉴定：电镜下可见AEC-Ⅱ的特征性结构——微绒毛及嗜锇性板层小体。(2)细胞凋亡形态检测：电镜下可见胞质回缩，染色质凝聚、边聚，细胞表面微绒毛稀少，嗜锇性板层小体排空。(3) Taq Man实时荧光定量RT—PCR检测各组AEC-Ⅱ的miR-21-5p水平：miR-21-5p过表达组与其他三组相比miR-21-5p的水平明显增高(p0.05)，（4）细胞早期凋亡率检测：与正常对照组比较，H2O2损伤组、miR-21-5p过表达组及miR-21-5p对照组的细胞凋亡率均随损伤时间的延长逐渐上升；与H2O2损伤组比较，同一时间点miR-21-5p过表达组的细胞凋亡率明显低于H2O2损伤组(p0.05)，miR-21-5p阴性对照组与H2O2损伤组比较差异无统计学意义(p0.05)。（5）Western blot检测各组AEC-ⅡBcl-2，Bax和caspase-3的表达：miR-21-5p过表达组Bax，caspase-3蛋白表达水平明显低于H2O2损伤组(p 0.05)，，Bcl-2蛋白表达水平明显高于H2O2损伤组(p 0.05)。 结论：(1) miR-21-5p具有抗AEC-Ⅱ凋亡作用。(2)以miR-21-5p作为AEC-Ⅱ凋亡调控的新靶点具有潜在应用价值。(3)腺病毒载体是转染AEC-Ⅱ的一种比较成功的基因转导载体。(4) miR-21-5p抗AEC-Ⅱ凋亡可能通过线粒体通路下调Bax，caspase-3蛋白表达水平明及上调Bcl-2蛋白表达水平有关。
【关键词】：AEC-Ⅱ 凋亡 miR-21-5p 腺病毒 分子机制
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R563.8
【目录】：

• 英汉缩略词对照表4-5
• 中文摘要5-6
• Abstract6-7
• 前言7-10
• 材料与方法10-13
• 统计学分析13-14
• 结果14-21
• 讨论21-24
• 结论24-25
• 参考文献25-29
• 综述：微小 RNA 在急性肺损伤中基因研究进展29-38
• 参考文献34-38
• 致谢38-39
• 作者简介39

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

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本文编号：917754