酪氨酸激酶受体DDR2信号在小鼠肺纤维化模型中的作用及干预研究

发布时间：2017-10-04 04:27

  本文关键词：酪氨酸激酶受体DDR2信号在小鼠肺纤维化模型中的作用及干预研究

  更多相关文章： DDR2 肺纤维化 肌成纤维细胞 血管新生 小分子抑制剂

【摘要】：肺纤维化是一种高度异质且致命的肺部疾病。病毒感染、放射治疗,接触化疗药物及雾化的环境毒素等因素可引起肺纤维化的发生。肺纤维化的发生大致经历以下几个过程:瘢痕的形成引起肺结构不可逆的破坏,进而导致器官功能故障,气体交换受到干扰,导致呼吸衰竭死亡,最终严重威胁人们的身体健康。DDRs是进化上高度保守的受体酪氨酸激酶家族之一,包含DDR1和DDR2两个成员,主要介导细胞与细胞外基质间的信号传递。正常生理条件下,DDRs可结合多种不同类型的胶原蛋白,在胚胎发育中发挥重要作用。当DDRs信号发生紊乱,则会导致诸如关节炎、癌症、成骨发育不全等疾病的发生。与此同时,DDRs还广泛参与细胞命运的决定,包括细胞迁移,细胞存活,增殖和分化,以及细胞外基质重塑等。前期研究表明DDR1基因敲除小鼠能有效的避免博来霉素诱导的肺纤维化的发生;与此同时,DDR2高表达于小鼠肺组织中。因此我们推测DDR2信号通路可能在肺纤维化的发生发展中扮演重要作用。我们主要从如下几个方面进行了研究:1.肺组织局部过表达或下调DDR2的表达,观察干预对肺纤维化病理进程的影响。2.免疫组织化学、免疫荧光等实验明确DDR2在人肺组织中的组织细胞定位,并在小鼠原代细胞中观察DDR2对细胞功能的调控机制研究。3.免疫荧光和Realtime-PCR等实验分析DDR2对肺纤维化诱导血管新生的影响。4.DDR2参与肺纤维化晚期组织修复的研究初探。5.小分子抑制剂D856、Dasatinib的抗肺纤维化研究。6.TSGA13基因功能初探。结论:胶原受体DDR2促进博来霉素诱导的肺纤维化进程
【关键词】：DDR2 肺纤维化 肌成纤维细胞 血管新生 小分子抑制剂
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R563;R-332
【目录】：

• 缩略语表7-9
• 中文摘要9-11
• ABSTRACT11-13
• 前言13-14
• 文献回顾14-40
• 第一部分 肺纤维化14-24
• （一）IPF发病机制14-16
• 阶段一：损伤15
• 阶段二：炎症15-16
• 阶段三：纤维化16
• （二）肌成纤维细胞myo Fbs与肺纤维化16-19
• myo Fbs的来源16-17
• myo Fbs的活化17-18
• myo Fbs的特点及功能18
• myo Fbs的失活18-19
• （三）TGF信号通路与肺纤维化19-20
• （四）血管新生与肺纤维化20-21
• （五）肺纤维化模型21-22
• （六）肺纤维化治疗靶点22-24
• 第二部分 DDRS信号通路24-40
• （一）DDRs概述24-36
• DDRs基因24-26
• DDRs蛋白26-29
• 胶原诱导DDRs活化29-36
• （二）DDRs生物学功能36-40
• DDRs与发育36-37
• DDRs与疾病37-40
• 第一部分 DDR2 信号对肺纤维化病理进程的影响40-62
• 1 实验材料40-44
• 1.1 实验动物40
• 1.2 主要试剂40-41
• 1.3 常用缓冲液41-44
• 1.4 主要仪器44
• 2 实验方法44-54
• 2.1 鼠尾基因组的提取44-45
• 2.2 小鼠基因型的鉴定45-46
• 2.3 博来霉素诱导小鼠肺纤维化模型的建立46
• 2.4 新鲜肺组织的获取及固定包埋46-47
• 2.5 肺组织切片染色47-50
• 2.6 免疫印迹（Western Blot）50-52
• 2.7 羟脯氨酸含量测定（HYP）52
• 2.8 小鼠siRNA的肺部给药52-53
• 2.9 小鼠腺病毒的肺部给药53
• 2.10 电镜观察53-54
• 3 实验结果54-60
• 3.1 DDR2 促进博来霉素诱导的肺纤维化的发生54-60
• 4 讨论60-62
• 第二部分 DDR2 调控肌成纤维细胞的活化62-80
• 1 实验材料62-64
• 1.1 人体标本62-63
• 1.2 实验动物63
• 1.3 主要试剂和试剂盒63
• 1.4 抗体63
• 1.5 缓冲液和培养基63-64
• 1.6 主要设备64
• 2 实验方法64-68
• 2.1 免疫组化64
• 2.2 原代细胞培养64-65
• 2.3 免疫荧光65
• 2.4 Realtime PCR65-67
• 2.5 WesternBloting67-68
• 3 实验结果68-78
• 3.1 DDR2 高表达于IPF肺组织并与α-SMA共定位68-69
• 3.2 DDR2 参与TGF-β1 诱导的myo Fbs的活化69-71
• 3.3 DDR2 诱导myoFbs形成的分子机制71-78
• 4 讨论78-80
• 第三部分 DDR2 调控肺纤维化过程中的血管新生80-87
• 1 实验材料80-81
• 1.1 实验动物80-81
• 1.2 主要试剂和试剂盒81
• 1.3 抗体81
• 1.4 主要设备81
• 2 实验方法81-82
• 2.1 组织免疫荧光81
• 2.2 Realtime PCR81-82
• 2.3 Western Bloting82
• 3 实验结果82-86
• 3.1 博莱霉素诱导肺纤维化后肺组织的微血管密度增加82-86
• 4 讨论86-87
• 第四部分 DDR2 小分子抑制剂D856 的抗纤维化研究87-99
• 1 实验材料87-88
• 1.1 实验动物87-88
• 1.2 主要试剂88
• 1.3 抗体88
• 1.4 主要设备88
• 2 实验方法88-89
• 2.1 Western Bloting88
• 2.2 Realtime PCR88-89
• 2.3 免疫组化89
• 2.4 HE染色和Masson染色89
• 2.5 羟脯氨酸HYP含量测定89
• 2.6 免疫荧光染色89
• 3 实验结果89-97
• 3.1 D856 的化学结构式89
• 3.2 D856 的半数抑制浓度的测定89-90
• 3.3 D856 抑制胶原诱导myoFbs活化（体外实验）90-91
• 3.4 D856 抑制肺纤维化的进程（体内实验）91-95
• 3.5 Dasatinib抑制博来霉素诱导的肺纤维化过程95-97
• 4 讨论97-99
• 第五部分 DDR2 调控肺纤维化的组织修复过程99-107
• 1 实验材料99-100
• 1.1 实验动物99
• 1.2 主要试剂99
• 1.3 抗体99
• 1.4 主要设备99-100
• 2 实验方法100
• 2.1 Western Bloting100
• 2.2 Realtime PCR100
• 2.3 免疫组化100
• 2.4 HE染色和Masson染色100
• 2.5 羟脯氨酸HYP含量测定100
• 3 实验结果100-106
• 3.1 博莱霉素诱导肺纤维化不同时间点DDR2 及其磷酸化的表达变化100-101
• 3.2 早期干预DDR2 的表达及其磷酸化抑制肺纤维化的发生101-104
• 3.3 晚期干预DDR2 的表达及其磷酸化延缓肺纤维化的进程104-106
• 4 讨论106-107
• 第六部分 肺纤维化相关基因TSGA13 的功能研究107-117
• 1 实验材料107-108
• 1.1 实验动物107
• 1.2 组织芯片和人结肠癌和邻近正常组织标本107
• 1.3 主要试剂107-108
• 1.4 主要设备108
• 2 实验方法108-109
• 2.1 基因树的构建108
• 2.2 蛋白同源比对108
• 2.3 TSGA13 siRNA的合成、溶解及滴鼻入肺108
• 2.4 Western Bloting108
• 2.5 免疫组化108-109
• 2.6 Masson染色109
• 3 实验结果109-116
• 3.1 下调TSGA13 表达肺纤维化状况减轻109
• 3.2 TSGA13 基因树109-111
• 3.3 TSGA13 蛋白质同源性分析111-112
• 3.4 TSGA13 抗体特异性的鉴定112
• 3.5 正常组织中TSGA13 的表达112-114
• 3.6 肿瘤组织中TSGA13 的表达114-116
• 4 讨论116-117
• 小结117-119
• 参考文献119-132
• 个人简历和研究成果132-134
• 个人情况132
• 学习与工作经历132
• 研究发表论文132-134
• 致谢134

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本文编号：968636