MSC调控DCs对ARDS小鼠肺部炎症反应影响的研究

发布时间：2017-10-05 10:44

  本文关键词：MSC调控DCs对ARDS小鼠肺部炎症反应影响的研究

  更多相关文章： 间充质干细胞 急性呼吸窘迫综合征 树突状细胞 调节性树突状细胞

【摘要】：目的：验证MSC通过调控DCs减轻ARDS小鼠肺部炎症反应。方法：C57BL/6小鼠64只,随机(随机数字法)分为①对照组：小鼠气道内注射与LPS等体积的NS,30min后尾静脉注射与MSC等体积的PBS;②ARDS组：小鼠气道内注射LPS 5mg/kg复制ARDS模型,30mmin后尾静脉注射与MSC等体积的PBS;③MSC组：小鼠气道内注射LPS 5mg/kg复制ARDS模型,30mmin后尾静脉注射MSC(100,000个细胞重悬于100 μl PBS); ④Creg组：小鼠气道内注射LPS 5mg/kg复制ARDS模型,30min后尾静脉注射DCreg(100,000个细胞重悬于100 μl PBS)。 6h和24h后处死小鼠,留取肺、脾脏、血液检测：(1)小鼠肺DCs的数量及成熟状态检测：流式细胞法(FCM)检测肺单细胞悬液中DCs数量及DCs表达CD11c、CDllb、MHCⅡ和CD40的水平。(2)小鼠脾脏DCs的数量、成熟状态及功能检测：FCM检测脾脏单细胞悬液中DCs数量及DCs表达CDllc、CD11b、MHCⅡ和CD40的水平;FITC-葡聚糖法检测脾脏DCs的吞噬功能；混合淋巴细胞培养检测脾脏DCs诱导T淋巴细胞增殖能力。(3)小鼠肺损伤程度检测：HE染色行肺组织病理学检查并行肺损伤评分评价肺损伤严重程度；计算肺湿重／体重比评价肺水肿程度；伊文思蓝实验评价肺血管内皮通透性。(4)小鼠肺和全身炎症反应检测：计算肺泡灌洗液中有核细胞总数和中性粒细胞计数评价炎症细胞的浸润程度；ELISA法检测肺组织匀浆和血清中IL-4、IL-10、IL-17、IFN-γ、TGF-β的浓度评价肺部和全身炎症反应。结果：(1)MSC能够抑制肺DCs的数量和成熟状态：与ARDS组比较,MSC组肺DCs比例在6h后有下降趋势(1.54±0.09)%,在24h后较ARDS组显著下降(1.814±0.2)%(p0.05)；与ARDS组比较,MSC组肺DCs表达CDllc、CD11bMHCII和CD40水平在24h均显著降低(p0.05)。(2)MSC能够抑制脾脏DCs的数量、成熟状态和免疫原性,增强脾脏DCs的吞噬能力：与ARDS组比较,MSC组脾脏DCs比例6h显著下降(2.02+0.15)%(p0.05),24h脾脏DCs进一步降至(1.29±0.07)%；与ARDS组比较,MSC组肺DCs表达CD11c、CD11b、MHCⅡ和CD40的水平在6h和24h均显著降低(p0.05); ARDS组与MSC组脾脏DCs在6h的吞噬功能无统计学差异(p0.05),在24h点MSC组脾脏DCs的吞噬功能较ARDS组显著增加(p0.05),诱导T淋巴细胞增殖的能力较ARDS组显著下降(p0.05),该脾脏DCs符合DCreg特性,说明MSC能诱导脾脏DCreg的生成。(3) DCreg和MSC可降低LPS诱导的ARDS小鼠肺部和全身炎症反应：与ARDS组比较,DCreg和MSC在6h、24h均可显著减轻BALF中有核细胞总数、中性粒细胞数,同时能有效降低肺组织和血清促炎介质IL-4. IL-17水平,并增加抗炎介质IL-10、IFN-γ和TGF-β水平(p0.05)。(4) DCreg和MSC减轻LPS诱导的ARDS小鼠肺损伤：与ARDS组比较,DCreg和MSC在6h和24h均可显著减轻肺病理损伤、降低肺损伤评分、减少肺湿重／体重比、降低肺微血管内皮对伊文思蓝的通透性(p0.05)。结论：MSC通过抑制DCs的数量和成熟状态、同时诱导DCreg的生成减轻ARDS小鼠肺部炎症反应。
【关键词】：间充质干细胞 急性呼吸窘迫综合征 树突状细胞 调节性树突状细胞
【学位授予单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R563.8
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 缩略词表10-12
• 前言12-17
• 参考文献15-17
• 文献综述17-23
• 参考文献21-23
• 主要实验仪器与试剂23-26
• 引言26-27
• 实验方法27-42
• 结果42-65
• 讨论65-70
• 参考文献70-73
• 结论73-74
• 已发表论文74-75
• 作者简介75-76
• 致谢76

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本文编号：976372