基于转录组测序的EV71感染RD细胞的基因表达变化研究

发布时间：2021-04-15 13:22

　　目的基于转录组测序技术探讨肠道病毒71型（EV71）感染对人横纹肌肉瘤（RD）细胞自噬和免疫的影响及其作用机制。方法用不同剂量EV71感染RD细胞确定感染复数（MOI）。在MOI=1时选择不同时间点（0、0.5、1、1.5、3、6、9和12 h）共8组进行后续实验。倒置显微镜观察细胞形态和数量变化;蛋白免疫印迹（Western blot）检测蛋白表达情况;运用转录组测序技术分析细胞功能及基因表达的变化;高内涵细胞成像技术观察细胞内蛋白表达情况。结果倒置显微镜可见细胞在病毒感染3 h由梭形贴壁逐渐变为圆形悬浮,细胞数量相比0 h明显减少（P<0.05）。Western blot结果显示细胞在感染后6 h、9 h、12 h,病毒在RD细胞内已经表达病毒衣壳蛋白1（VP-1）,感染后9 h自噬相关蛋白LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ与0 h组相比明显升高（P<0.01）。转录组测序结果显示EV71感染RD细胞后3 h细胞内基因表达变化达到峰值,上调基因1 199个,下调基因126个。KEGG分析提示改变的信号通路分子大多与自噬和免疫相关。高内涵细胞成像显示细胞在感染后数量减少,细胞内自噬蛋... 

【文章来源】：天津医药. 2020,48(08)北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

不同时间EV71感染RD细胞形态和数量变化

高内涵细胞成像结果显示，RD细胞在感染后细胞数量明显减少，病毒感染引起细胞产生病变和死亡。但细胞内平均荧光强度明显增加，随着病毒进入细胞，引起细胞内自噬蛋白Atg5(F=3.719,P<0.05）、Rictor(F=3.588,P<0.05）表达上调，见图5。图4 GO富集和KEGG信号通路分析EV71感染RD细胞3 h后基因差异表达

GO富集和KEGG信号通路分析EV71感染RD细胞3 h后基因差异表达

【参考文献】：
期刊论文
[1]金黄色葡萄球菌通过TLR2/PI3K信号诱导巨噬细胞的炎症反应和自噬[J]. 李帅,方磊,王炯,刘荣玉.  细胞与分子免疫学杂志. 2017(09)
[2]EV71的感染和抗病毒天然免疫应答[J]. 谢广成,段招军.  病毒学报. 2016(04)



本文编号：3139419