人锌转运体8嵌合抗原受体表达载体的构建与初步应用

发布时间：2021-05-10 17:50

　　目的:构建人锌转运体8（zinc transporter 8,ZnT8）嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor,CAR）的慢病毒表达载体,为研究抗原特异性调节性T细胞（regulatory T cells,Tregs）在1型糖尿病（type 1 diabetes mellitus,T1DM）自身免疫中的调节作用提供实验基础。方法:通过分子克隆及基因重组技术构建PLVX-EGFP-ZnT8 scfv慢病毒表达载体质粒,并制备ZnT8 scfvCAR慢病毒;利用ZnT8 scfv-CAR慢病毒感染Tregs,流式细胞术检测绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）的表达确定慢病毒感染效率;细胞计数评估Tregs细胞增殖能力;流式细胞术检测增殖细胞中CD4、CD25、Foxp3和Helios的表达。结果:酶切鉴定和基因测序结果显示PLVX-EGFP-ZnT8 scfv慢病毒表达载体构建成功;质粒共转染293T细胞后制备浓缩慢病毒滴度为2.4×10⁸TU/μL;ZnT8 scfv-CAR慢病毒转染Tregs后GFP... 

【文章来源】：南京医科大学学报(自然科学版). 2020,40(07)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 ZnT8 scfv-CAR慢病毒载体质粒的构建
        1.2.2 慢病毒制备并感染293T细胞
        1.2.3 流式分选Tregs
        1.2.4 ZnT8 scfv-CAR Tregs的构建与扩增
        1.2.5 ZnT8 scfv-CAR Tregs体外扩增后表型检测
    1.3 统计学方法
2 结果
    2.1 慢病毒载体的构建与鉴定
    2.2 ZnT8 scfv-CAR慢病毒成功转染293T细胞
    2.3 ZnT8 scfv-CAR Tregs的鉴定
    2.4 ZnT8 scfv-CAR Tregs能在体外高效扩增
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]体外高效扩增人外周血调节性T细胞技术的建立[J]. 王星,吴倩,王悦舒,张玲玉,秦瑶,许馨予,张梅.  南京医科大学学报(自然科学版). 2018(08)
[2]Screening and identification of human Zn T8-specific single-chain variable fragment （scFv） from type 1 diabetes phage display library[J]. Qian Wu,Xiaodong Wang,Yong Gu,Xiao Zhang,Yao Qin,Heng Chen,Xinyu Xu,Tao Yang,Mei Zhang.  Science China（Life Sciences）. 2016(07)



本文编号：3179793