IFIT3对严重发热伴血小板减少综合征病毒复制的影响及其机制的初步研究
发布时间：2021-05-11 03:30
研究背景和目的:严重发热伴血小板减少综合征病毒（SFTSV）,感染后导致严重发热伴血小板减少综合征（SFTS）,死亡率较高。目前其致病机制尚不明确,临床以对症治疗为主,药物研发进展缓慢。干扰素（interferon,IFN）介导的固有免疫应答是抵抗病原体入侵的首要防线之一。干扰素刺激基因（IFN-stimulatedgenes,ISGs）是干扰素信号通路激活后的最终效应分子,发挥抗病毒和/或免疫调节作用,干扰素诱导的四肽重复蛋白3（IFIT3）就是其中之一。IFIT3在登革病毒、水泡口炎病毒等多种病毒感染中发挥着抗病毒作用;在SFTSV感染的单核细胞中IFIT3表达显著增加。这些数据提示,IFIT3与病毒感染关系密切,但其对SFTSV的作用尚无相关报道,具体机制也有待进一步研究。本研究的目的在于研究在体外培养体系中,IFIT3对SFTSV复制的影响并初步探究其作用机制。研究方法:1.通过转染质粒或siRNA分别上调或下调A549细胞中IFIT3的表达,real-time PCR及Western Blot等方法检测IFIT3的表达及SFTSV复制情况;2.通过转染质粒或siRNA调节A5...
【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
一、研究背景
1.严重发热伴血小板减少综合征病毒
1.1.SFTSV病原学
1.2.SFTSV的流行病学,临床症状和诊断
1.3.SFTSV的传播途径
1.4.SFTSV的治疗与疫苗研究
2.干扰素信号通路与IFIT3
2.1.干扰素信号通路
2.2.干扰素诱导的四肽重复蛋白3
2.3.SFTSV感染与固有免疫
3.研究目的及意义
3.1.研究目的
3.2.研究意义
4.技术路线图
4.1.IFIT3高表达质粒的构建
4.2.IFIT3对SFTSV及IFNβ抗病毒作用的影响
4.3.IFIT3对JAK/STAT信号通路的影响
二、实验材料
1.实验仪器、试剂与耗材
2.菌株细胞和培养基
3.常用质粒及其载体
4.常用荧光定量PCR引物
5.常用试剂及配制方法
三、实验方法
1.细胞培养
2.SFTSV感染A549细胞
3.细胞内总RNA的提取
4.逆转录PCR
5.荧光定量PCR
6.干扰素α/β刺激A549细胞
7.利用逆转录所得cDNA构建IFIT3表达质粒
8.大提质粒
9.细胞转染
10.提取细胞总蛋白
11.BCA法测蛋白浓度
12.蛋白质免疫印迹
13.双荧光报告基因实验
14.统计学分析
四、实验结果
1.SFTSV感染细胞
2.SFTSV感染诱导IFIT3表达增加
3.高表达IFIT3抑制SFTSV复制
3.1.在A549细胞中Ⅰ型干扰素诱导IFIT3表达
3.2.成功构建IFIT3-pcDNA3.1-3×tag高表达质粒
3.3.IFIT3-pcDNA3.1-3×tag质粒在293T和A549细胞中成功表达
4.IFIT3对SFTSV复制的影响
4.1.高表达IFIT3质粒可以抑制SFTSV的复制
4.2.敲低IFIT3的表达促进SFTSV的复制
5.IFIT3可以调节Ⅰ型干扰素的产生
5.1.高表达IFIT3可以促进IFNβ的产生
5.2.敲低IFIT3的表达削弱Ⅰ型干扰素的产生
6.IFIT3调节JAK/STAT信号通路
6.1.IFIT3调节STAT1磷酸化
6.2.IFIT3可以调节ISRE的活性
6.3.IFIT3调节ISGs的表达
7.过表达IFIT3协同促进IFNβ对SFTSV的抑制作用
7.1.外源性Ⅰ型干扰素抑制SFTSV复制
7.2.高表达IFIT3可以增强IFNβ对SFTSV的抑制作用
7.3.高表达IFIT3可以增强IFNβ对ISGs的促进作用
8.高表达IFIT3对TLR3,RIG-Ⅰ及MDA5的影响
五、讨论
六、结论
参考文献
附录
文献综述 严重发热伴血小板减少综合征病毒（SFTSV)在输血安全中的研究进展
参考文献
个人简历
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]干扰素刺激基因15抑制严重发热伴血小板减少综合征病毒复制的初步研究[J]. 陈旭,李世林,曾沛斌,陈利民. 中国输血杂志. 2017(03)
[2]发热伴血小板减少综合征实验室诊断方法的比较与评价[J]. 程宁宁,杜燕华,黄学勇,李懿,赵伊珂,马红霞,许汴利. 天津医药. 2017(02)
[3]Current status of severe fever with thrombocytopenia syndrome in China[J]. Jianbo Zhan,Qin Wang,Jing Cheng,Bing Hu,Jing Li,Faxian Zhan,Yi Song,Deyin Guo. Virologica Sinica. 2017(01)
[4]案例分析——美国西尼罗河热疫情的暴发与防控[J]. 史雪萍,樊晓旭,吴晓东,张永强,李林,李金明,戈胜强,王志亮,马洪超. 中国动物检疫. 2016(12)
[5]AllGlo探针Real-time RT-PCR检测发热伴血小板减少综合征病毒[J]. 李志锋,胡建利,鲍倡俊,王笑辰,祁贤. 江苏预防医学. 2016(05)
[6]基于上转化发光免疫层析技术建立发热伴血小板减少综合征病毒总抗体快速检测方法[J]. 黄超,张文帅,张黎,温恬,史凤娟,曾晓燕,迟莹,史智扬,焦永军. 江苏预防医学. 2015(04)
[7]中国2011-2014年发热伴血小板减少综合征流行特征分析[J]. 李昱,周航,牟笛,殷文武,余宏杰. 中华流行病学杂志. 2015 (06)
[8]基于逆转录-环介导等温扩增技术快速检测发热伴血小板减少综合征病毒方法的建立[J]. 葛以跃,赵康辰,崔仑标,戚宇华,郭喜玲,陈银,焦永军,史智扬,周明浩. 江苏预防医学. 2014(04)
[9]湖北省发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒健康人群抗体水平分析[J]. 占建波,霍细香,官旭华,江永忠,徐军强,李国明,刘力,詹发先. 中国卫生检验杂志. 2013(04)
[10]东海县发热伴血小板减少综合征病毒鼠携带情况调查[J]. 葛恒明,王庆奎,李志锋,王燕萍,胡建利,胡书铭,陆大江,王相化,刘瀚泽,韩俊阁. 江苏预防医学. 2012(06)
本文编号：3180631
【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
一、研究背景
1.严重发热伴血小板减少综合征病毒
1.1.SFTSV病原学
1.2.SFTSV的流行病学,临床症状和诊断
1.3.SFTSV的传播途径
1.4.SFTSV的治疗与疫苗研究
2.干扰素信号通路与IFIT3
2.1.干扰素信号通路
2.2.干扰素诱导的四肽重复蛋白3
2.3.SFTSV感染与固有免疫
3.研究目的及意义
3.1.研究目的
3.2.研究意义
4.技术路线图
4.1.IFIT3高表达质粒的构建
4.2.IFIT3对SFTSV及IFNβ抗病毒作用的影响
4.3.IFIT3对JAK/STAT信号通路的影响
二、实验材料
1.实验仪器、试剂与耗材
2.菌株细胞和培养基
3.常用质粒及其载体
4.常用荧光定量PCR引物
5.常用试剂及配制方法
三、实验方法
1.细胞培养
2.SFTSV感染A549细胞
3.细胞内总RNA的提取
4.逆转录PCR
5.荧光定量PCR
6.干扰素α/β刺激A549细胞
7.利用逆转录所得cDNA构建IFIT3表达质粒
8.大提质粒
9.细胞转染
10.提取细胞总蛋白
11.BCA法测蛋白浓度
12.蛋白质免疫印迹
13.双荧光报告基因实验
14.统计学分析
四、实验结果
1.SFTSV感染细胞
2.SFTSV感染诱导IFIT3表达增加
3.高表达IFIT3抑制SFTSV复制
3.1.在A549细胞中Ⅰ型干扰素诱导IFIT3表达
3.2.成功构建IFIT3-pcDNA3.1-3×tag高表达质粒
3.3.IFIT3-pcDNA3.1-3×tag质粒在293T和A549细胞中成功表达
4.IFIT3对SFTSV复制的影响
4.1.高表达IFIT3质粒可以抑制SFTSV的复制
4.2.敲低IFIT3的表达促进SFTSV的复制
5.IFIT3可以调节Ⅰ型干扰素的产生
5.1.高表达IFIT3可以促进IFNβ的产生
5.2.敲低IFIT3的表达削弱Ⅰ型干扰素的产生
6.IFIT3调节JAK/STAT信号通路
6.1.IFIT3调节STAT1磷酸化
6.2.IFIT3可以调节ISRE的活性
6.3.IFIT3调节ISGs的表达
7.过表达IFIT3协同促进IFNβ对SFTSV的抑制作用
7.1.外源性Ⅰ型干扰素抑制SFTSV复制
7.2.高表达IFIT3可以增强IFNβ对SFTSV的抑制作用
7.3.高表达IFIT3可以增强IFNβ对ISGs的促进作用
8.高表达IFIT3对TLR3,RIG-Ⅰ及MDA5的影响
五、讨论
六、结论
参考文献
附录
文献综述 严重发热伴血小板减少综合征病毒（SFTSV)在输血安全中的研究进展
参考文献
个人简历
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]干扰素刺激基因15抑制严重发热伴血小板减少综合征病毒复制的初步研究[J]. 陈旭,李世林,曾沛斌,陈利民. 中国输血杂志. 2017(03)
[2]发热伴血小板减少综合征实验室诊断方法的比较与评价[J]. 程宁宁,杜燕华,黄学勇,李懿,赵伊珂,马红霞,许汴利. 天津医药. 2017(02)
[3]Current status of severe fever with thrombocytopenia syndrome in China[J]. Jianbo Zhan,Qin Wang,Jing Cheng,Bing Hu,Jing Li,Faxian Zhan,Yi Song,Deyin Guo. Virologica Sinica. 2017(01)
[4]案例分析——美国西尼罗河热疫情的暴发与防控[J]. 史雪萍,樊晓旭,吴晓东,张永强,李林,李金明,戈胜强,王志亮,马洪超. 中国动物检疫. 2016(12)
[5]AllGlo探针Real-time RT-PCR检测发热伴血小板减少综合征病毒[J]. 李志锋,胡建利,鲍倡俊,王笑辰,祁贤. 江苏预防医学. 2016(05)
[6]基于上转化发光免疫层析技术建立发热伴血小板减少综合征病毒总抗体快速检测方法[J]. 黄超,张文帅,张黎,温恬,史凤娟,曾晓燕,迟莹,史智扬,焦永军. 江苏预防医学. 2015(04)
[7]中国2011-2014年发热伴血小板减少综合征流行特征分析[J]. 李昱,周航,牟笛,殷文武,余宏杰. 中华流行病学杂志. 2015 (06)
[8]基于逆转录-环介导等温扩增技术快速检测发热伴血小板减少综合征病毒方法的建立[J]. 葛以跃,赵康辰,崔仑标,戚宇华,郭喜玲,陈银,焦永军,史智扬,周明浩. 江苏预防医学. 2014(04)
[9]湖北省发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒健康人群抗体水平分析[J]. 占建波,霍细香,官旭华,江永忠,徐军强,李国明,刘力,詹发先. 中国卫生检验杂志. 2013(04)
[10]东海县发热伴血小板减少综合征病毒鼠携带情况调查[J]. 葛恒明,王庆奎,李志锋,王燕萍,胡建利,胡书铭,陆大江,王相化,刘瀚泽,韩俊阁. 江苏预防医学. 2012(06)
本文编号：3180631
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