动物鼻式气溶胶暴露装置在病原感染动物模型中的应用及评价

发布时间：2021-07-25 23:47

　　目的 对动物鼻式气溶胶暴露装置进行性能评价,并验证装置消毒灭菌效果,为生物安全实验及感染性活动提供安全保障。方法 选择对人不致病的大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）和鼠肝炎病毒（Mouse hepatitis virus,MHV）分别代表细菌、病毒为模式微生物,通过动物鼻式气溶胶暴露装置产生E.coli气溶胶和MHV气溶胶,评价气溶胶产生效果及活力。分别用75%乙醇气溶胶和3%过氧化氢气溶胶对系统消毒,评价消毒灭菌效果。分别采集暴露舱内、设备连接处易发生泄露部位及消毒后气溶胶。对E.coli气溶胶采集样本进行微生物培养及菌落计数;对MHV气溶胶采集液提取RNA,qRT-PCR检测样本中病毒RNA。结果 装置产生的E.coli气溶胶颗粒中值直径为（1.27±0.61）μm,暴露舱内采样液涂板有菌落生长,置于暴露舱不同端口的NC膜上菌落数无显著性差异,易泄露处的沉降平皿及消毒后的采样平皿上均无菌落生长。暴露舱内采样液中的MHV病毒RNA为阳性,易发生泄露处及消毒后采样液中病毒RNA为阴性。结论 动物鼻式气溶胶暴露装置能正常运行,产生（1.27±0.61）μm的气溶胶... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１鼻式气溶胶暴露装置简图

．２．２气溶胶到达暴露舱端口评价??将６．５?ｍＬ上述备好的大肠杆菌悬浮液倒入暴露装置气溶胶发生器的雾化小内，设置雾化流量为〇．６Ｌ／ｍｉｎ，稀释流量为１８．３Ｌ／ｍｉｎ，排气流量为２０Ｌ／ｍｉｎ，压力为２０ＰＳＩ，采样流量为２．２Ｌ／ｍｉｎ，维持暴露舱内微负压，以２ｍＬＬＢ液体培??基作为采样液，系统运行５ｍｉｎ后，液体撞击采样器采样２０?ｍｉｎ。分别取采样液１??Ｌ涂于两个ＬＢ固体培养基上，于３７°Ｃ下培养１２?ｈ，观察培养基上是否有菌落，评价暴露舱端口是否有气溶胶通过。??．２．３气溶胶分布均匀性评价??动物放射状鼻式暴露舱共４层，每层随机选取３个端口放置一个固定管（如１－１Ｄ，图?１－２?所示），取￣１?ｃｍ２?的?ＮＣ?膜（Ｎｉｔｒｏｃｅｌｌｕｌｏｓｅ?ｍｅｍｂｒａｎｅ，ＮＣ?膜）置于鼠固定器前端端口处采样２０?ｍｉｎ。将ＮＣ膜放于ＬＢ固体培养基上，于３７°Ｃ下培１２?ｈ，观察ＮＣ膜上是否有菌落生长并计数，评价暴露舱各端口是否均有气溶胶达，气溶胶分布是否均匀。其他参数设置同２．２．２。??

小鼠体重变下降率均超过２５％?（执行仁慈终点），感染后１１?ｄ内小鼠存活率为０％。??实验结果表明，小鼠暴露于甲型Ｈ１Ｎ１流感病毒气溶胶下的时间可设置为多２５?ｍｉｎ。??（如图２－３所示）??Ａ?ｔ?？??．．．ｔ?Ｕ?２?４?６?＊?１０?１２?Ｍ??？?？?ｉｉｉｕｉ?＜?ｍｍ?★?１０?ｉｉｕｉｉ?Ｉ＇?ｍｕｉ?？?２０?ｉｍｎ?２?ｍｍ?？?＜?ｍｉｎ?★?１０?ｉｉｉｕｉ?１５?ｎｉｍ?令?２０?ｍｍ??＾?２＇?ｎｎｎ?Ｓ－?Ｕ）?ｍｍ?金?Ｐ?ｍｕｉ?＾?ｒ．?：３ｌ?〇?ｕｉｍ?Ｑ?？〇?ｉｕｉｈ?古ｌｕｕｌ?子中Ｉ??图２－?３?Ｈ１Ｎ１气溶胶暴露不同时间后小鼠体重变化率及存活率图??Ｆｉｇｕｒｅ?２－?３?Ｗｅｉｇｈｔ?ｃｈａｎｇｅ?ａｎｄ?ｓｕｒｖｉｖａｌ?ｒａｔｅｓ?ｏｆ?ｍｉｃｅ?ｆｏｒ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｔｉｍｅｓ?ｐｏｓｔ?ｅｘｐｏｓｕｒｅ??注：Ａ：?Ｈ１Ｎ１气溶胶暴露不同时间后小鼠体重变化率图（＞＜０．０５，…ｐ＜０．００１／…ｐ＜０．０００１）；?Ｂ：??Ｈ１Ｎ１气溶胶暴露不同时间后小鼠存活率图（…ｐ＜０．００１，＂＂ｐ＜０．０００１）。??Ｎｏｔｅ．?Ａ，?ｔｈｅ?ｗｅｉｇｈｔ?ｃｈａｎｇｅ?ｏｆ?Ｈ１Ｎ１?ｐｏｓｔ－ｅｘｐｏｓｕｒｅ?ｍｉｃｅ?ｆｏｒ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｔｉｍｅｓ．?（＊ｐ＜０．０５，?＊＊＊ｐ＜０．００１，??…＊ｐ＜０．０００１）．?Ｂ

【参考文献】：
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本文编号：3303013