孤儿核受体Rev-erbα在小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化中的作用

发布时间：2021-08-08 16:00

　　背景:孤儿核受体Rev-erbα已被证明在骨代谢过程中发挥着重要作用,但其在调节骨髓间充质干细胞成骨分化过程中的具体机制尚不明确。目的:研究孤儿核受体Rev-erbα是否参与小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化能力的调节。方法:以全骨髓贴壁法进行小鼠骨髓间充质干细胞的分离培养,构建携带Rev-erbα基因的慢病毒载体并转染至体外培养的第3代骨髓间充质干细胞,转染后48 h采用Real Time PCR法检测Rev-erbα基因水平的表达。实验分为3组:实验组骨髓间充质干细胞转染过表达Rev-erbα基因及EGFP基因的慢病毒载体,阳性对照组骨髓间充质干细胞转染含EGFP基因的空病毒载体,设立不含病毒原液的阴性对照组,分别进行成骨诱导并在第0,7,14天采用Real Time PCR法检测成骨分化相关指标碱性磷酸酶、骨桥蛋白、骨钙素的表达变化。结果与结论:①携带Rev-erbα基因的慢病毒成功转染到骨髓间充质干细胞中并稳定表达;②随着成骨诱导时间延长,成骨相关指标碱性磷酸酶、骨桥蛋白表达增加,但组间差异无显著性意义,骨钙素表达增加,但实验组明显低于阳性对照组和对照组（P<0.05）;③结果... 

【文章来源】：中国组织工程研究. 2020,24(31)北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

PCR扩增产物及阳性克隆筛选

在成骨诱导后第0,7,14天分别用Real Time PCR检测成骨相关标志物碱性磷酸酶、骨桥蛋白、骨钙素m RNA水平。碱性磷酸酶表达随成骨诱导时间延长逐渐增加，但实验组与阳性对照组及阴性对照组间比较差异无显著性意义(P>0.05)，见图3。骨桥蛋白表达在第7天较高，而第14天表达减少，但组间比较差异仍无显著性意义(P>0.05)，见图4。骨钙素表达随成骨诱导逐渐增加，但实验组骨钙素表达明显低于阳性对照组及阴性对照组(P<0.05)，说明过表达Rev-erbα抑制了骨钙素的表达，见图5。图3 各组骨髓间充质干细胞成骨诱导过程中碱性磷酸酶(ALP)m RNA相对表达

各组骨髓间充质干细胞成骨诱导过程中碱性磷酸酶(ALP)m RNA相对表达

【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化中的核受体Rev-erbα及Rorα[J]. 林富伟,徐晓梅,崔琰,谢乙加,赵青.  中国组织工程研究. 2018(17)
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本文编号：3330252