间充质干细胞在玻璃化冻存人卵巢组织异种移植兔模型中的应用探索

发布时间：2017-04-28 19:15

  本文关键词：间充质干细胞在玻璃化冻存人卵巢组织异种移植兔模型中的应用探索，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景： 当今社会中,罹患肿瘤的患者数量逐年提高且发病年龄有年轻化的趋势,各类治疗手段的不断进步,使得患者的生存率改善,但治疗的副作用迫使许多年轻女性失去生育能力,这部分人群有着恢复生育能力的强烈需求；此外,部分正常女性因个人原因、社会经济等因素主观上要求推迟自身的生育时间但却面临卵巢功能随年龄增长日渐衰退的风险。因此,通过某种技术保存生育功能并在适当的时机进行移植恢复,包括内分泌功能和生育功能,是有现实意义的。卵巢组织冷冻保存技术能够实现在体外长期保存卵巢,多项实验证明其正常卵泡的保存效率可达90%以上。卵巢组织的异种移植是恢复生育能力的途径之一,但移植早期面临缺血缺氧,可导致卵泡大量丢失；移植后期,因免疫排斥问题,亦可导致组织的坏死。间充质干细胞(MSCs)作为再生医学领域内一种有巨大潜力的细胞,具有诱导分化和一定的免疫调节能力。将其应用于卵巢组织异种移植兔模型中国内外均未见报道。因此,研究MSCs在兔体内的走行以及对移植卵巢组织所起的作用的探索,包括局部调节能力及组织再生能力,对于提高卵巢组织的移植效果具有重要的意义。 目的： 1、提高玻璃化冻存的效率,以期体外长期保存女性生育功能。 2、研究MSCs在人卵巢组织异种移植兔模型中的走行,在移植部位中发挥的免疫调节能力及组织修复能力,提高卵巢组织的存活能力。 3、寻找MSCs的最佳给药方式。 方法： 将新鲜的卵巢组织通过玻璃化冻存的方法进行低温保存,4周后进行复苏,于2小时内进行移植。选择20只性成熟的雌性新西兰大白兔作为人卵巢组织异种移植的受体,经去势手术处理后随机分配到4组中。经冻存-复苏后的人卵巢组织移植到兔背肌内,按以下不同处理分成四组：1、MSC组：MSCs耳缘静脉注射(1x106/kg)+等量生理盐水肌注；2、FTY组：MSCs培养基耳缘静脉注射+FTY720肌注(2mg/kg/d);3、MFIV组：MSCs耳缘静脉注射(1x106/kg)+FTY720肌注(2mg/kg/d);4、MFIM组：MSCs肌注(1x106/kg)+FTY720肌注(2mg/kg/d).所有MSCs均于注射前用CM-Dil染料进行处理。移植前3天起除MSC组外,其余三组每天使用FTY720(2mg/kg)进行免疫抑制。所有移植物于移植后8周全部回收。移植物移植前用HE染色及电镜评估组织的形态完整性；采用酶联免疫法检测兔外周血E2水平及IFN-γ水平；取新鲜抗凝全血检测兔外周血中CD4及CD8淋巴细胞的比例；8周后记录卵巢组织回收率及观察肉眼形态；回收后移植物HE染色观察组织形态及纤维化坏死率；取移植部位及其他全身实质器官用激光共聚焦观察MSCs的走行情况。 结果： 1、使用卵巢组织玻璃化冻存的方法能较好的保存卵巢组织,包括卵泡、粒细胞及基质； 2、不同给药方式给与的间充质干细胞均可以在体内游走,8周后不同部位定植细胞的数量为移植部位脾脏肺等其他实质器官； 3、FTY720联合MSCs可以更好地减轻免疫排斥反应,维持卵巢组织分泌雌二醇,且降低基质的纤维化和坏死率； 4、经静脉注射的MSCs其移植部位定植的细胞量多于局部注射组,免疫排斥反应亦低于局部注射组。 结论： 1、间充质干细胞和FTY720联合应用存在一定的协同作用,可以促进组织的存活,降低免疫排斥反应。 2、间充质干细胞经静脉给药可更加有效的提高卵巢组织存活率,保存卵巢功能。
【关键词】：卵巢组织 异种移植 间充质干细胞 兔
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R713.6;R-332
【目录】：

• 致谢4-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-12
• 中英文缩略词12-13
• 目录13-14
• 1. 引言14-18
• 2. 实验材料与方法18-28
• 3. 实验结果28-39
• 4. 讨论39-42
• 5. 结论42-43
• 参考文献43-46
• 综述46-59
• 参考文献53-59
• 作者简历及在学期间所取得的科研成果59

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 刘德伍;李晓亮;张志安;;血管内皮细胞生长因子联合碱性成纤维细胞生长因子体外诱导人骨髓间充质干细胞分化为血管内皮样细胞[J];中国组织工程研究与临床康复;2008年47期

2 付小兵,方利君,王玉新,孙同柱,程飚;骨髓间充质干细胞自体移植提高猪皮肤创面修复质量的初步研究[J];中华医学杂志;2004年11期

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本文编号：333422