白念珠菌ORF19.273和FLO8基因在耐药与宿主免疫中的功能和机制研究

发布时间：2021-08-12 20:59

　　近几年,随着临床上癌症治疗、器官移植中免疫抑制剂的使用以及艾滋病等疾病导致的免疫受损患者的增多,真菌感染的发病率也在不断攀升。院内血源性感染中真菌感染已经上升至第4位。即便在现有的抗真菌药物治疗下,系统性真菌感染导致的死亡率仍高达40%-70%。现有的抗真菌治疗手段有限,而唑类药物作为常用抗真菌药物出现了严重的耐药现象。在经过唑类药物长期治疗的患者中,分离的白念珠菌对唑类药物的耐药率高达40%。因此,阐明唑类药物的耐药机制,寻找新的抗真菌治疗的手段是临床抗真菌感染急需解决的问题。白念珠菌对于唑类药物的耐药机制研究已经取得了一些进展,主要是关于唑类合成通路以及外排泵相关基因的突变和高表达导致的耐药问题。阐明白念珠菌对于靶向于麦角甾醇合成的唑类药物的耐药机制,解决唑类耐药问题,需要彻底阐明白念珠菌麦角甾醇合成通路的调控网络。已有的研究表明,白念珠菌甾醇合成通路主要通过转录因子Upc2p调控相关甾醇合成酶的表达。但在酿酒酵母中,甾醇合成的调控不仅局限于转录水平还包括翻译后调控等方式,但这种翻译后调控的方式在白念珠菌中很少有文献报道,仍需要进一步研究。本文选取了与酿酒酵母中调控羟甲基戊二酰乙酰... 

【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校

【文章页数】：132 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

PCR验证NSG2敲除菌和回复菌的正确性

在构建了?７Ｖ５Ｇ２基因缺失菌后，我们考察了?ＪＶ５Ｇ２基因对于白念珠菌生长和菌??丝形成方面的影响。生长曲线测定显示，７Ｖ５Ｇ２基因缺失菌生长速率与亲本菌ＳＮ１５２??和ＭＧ２回复菌一致，说明７ＶＳＧ２对于白念珠菌的增殖速率并无影响（图１．２Ａ）。??菌丝和被膜形成是白念珠菌致病力的关键影响因素，白念珠菌中存在大量基因通过??调控白念珠菌菌丝和被膜形成影响白念珠菌的毒力，本实验初步考察了?７Ｖ５Ｇ２对于??是否参与了白念珠菌菌丝和被膜的形成。通过利用菌丝诱导培养基ｓｐｉｄｅｒ和Ｌｅｅ’ｓ在??３７°Ｃ条件下诱导菌丝发现，ＭＧ２缺失菌菌丝形成并无缺陷，在两种菌丝诱导培养基??中均能形成正常菌丝（图１．２Ｂ）。利用ＸＴＴ染色法，我们考察了?ＭＧ２缺失菌在??ＲＰＭＩ１６４０培养基中的被膜形成情况，结果显示ＭＧ２缺失后被膜形成无差异。本部??分，初步考察了?缺失菌的生长及毒力因子相关表型，证明基因并不影??响白念珠菌正常的生长增殖和菌丝形成。??Ａ．?Ｂ．?ｃ－?１＇５＇??ｌ?＊ｎＳｇ２Ａ／Ａ?Ｓｐｉｄｅｒ?，?【４秦＇鐵篆雇?Ｎ?１．０－?ｒ＝－ｌ?￣?ｆ＾－ｌ?ｒ＝ｎ??ｓ３°－?；?．．?§〇．＝－??§２０－?／??ＬＪ??Ｌｅｅ

海军军医大学博士毕业论文??但对于两性霉素Ｂ，７Ｖ５Ｇ２基因缺失菌比亲本菌ＳＮ１５２和ＭＧ２基因回复菌更耐受??（图１．３）。这一结果提示我们ＭＧ２基因参与调控白念珠菌中甾醇的合成，但与酿??酒酵母７Ｖ５Ｇ２缺失导致的洛伐他汀敏感表型并不一致，说明基因在酿酒酵母??和白念珠囷中功能并不完全￣■致。??ＳＮ１５２?ｒ?Ｔ?Ｔ??ｎｓｇ２６／＾－ｌ?ｌ??ｎｓｇ２Ａ／Ａ＋ＮＳＧ２?ＯｌＺ２３？Ｑ??ＹＰＤ?ＦＬＣ?ＩＴＣ??ＳＮ１５２?＾ｏｒ＾ｐｐＢｉ?ｒ??ｎｓｇ２Ａ／Ａ－ｌ?｜?■?＇??ｎｓｇ２／３／Ｗ?匿?＇：：．錢．：泛??ｎｓａ２ａ／Ａ＋ＮＳＧ２?ＴＭ?＾?ｉｆ??ＫＴＣ?ＭＣＺ?ＬＯＶ??ＳＮ１５２?＿?善??—｜．?ｍｔｍ?：??ｎｓｇＺＡ／Ａ－２??ｎｓｇ２Ａ／Ａ＋ＮＳＧ２??Ｔｅｒｂｉｎａｆｉｎｅ?Ｆｅｎｐｒｏｐｉｍｏｒｐｉｎ?ＡｍＢ??图１．３?７＾（７２缺失菌对于卩坐类药物敏感性升高。３０（＾３８３７检测８＞１１５２、？＾２』／＾－１、？７叹２」／＾－２、??ｍｇ２Ｊ／』＋ＮＳＧ２对于不同抑制剂的敏感性，氟康唑（ＦＬＣ）?５｜ｉｇ／ｍｌ，伊曲康唑（ＩＴＣ）?２．５ｇｇ／ｍｌ，??酮康唑（ＫＴＣ）?２．５ｎｇ／ｍｌ，咪康唑（ＭＣＺ）?２．５（ｉｇ／ｍｌ，洛伐他汀（ＬＯＶ）?８｜ｉｇ／ｍｌ，特比萘芬??２．５ｐｇ／ｍｌ，丁苯吗啉?２．５｜ｉｇ／ｍｌ，两性霉素?Ｂ?（ＡｍＢ）?０．５｜ｉｇ／ｍｌ〇??４．?ＭＧ２基因缺失后影响白念珠菌细胞膜结构和通透性??唑类药物通过抑制真菌麦角留醇合成和毒性留醇的累积影响真菌细胞膜的结构??和功能

【参考文献】：
期刊论文
[1]白色念珠菌诱导小鼠胸腺细胞凋亡的基因调控[J]. 陈欲晓,韦超凡.  细胞与分子免疫学杂志. 2000(03)



本文编号：3339066