摘除泪腺和泪腺注射肉毒杆菌毒素A制备大鼠干眼模型的比较
发布时间：2021-08-13 07:48
目的:分别采用摘除泪腺法和泪腺注射肉毒杆菌毒素A法诱导大鼠干眼症模型,通过对比两种干眼症模型的临床表现、病理学特点和细胞因子变化,探讨其优缺点和适用范围。方法:健康8周龄雄性Brown Norway大鼠30只,随机分为3组:A组左眼为空白组,B组摘除大鼠左侧主泪腺,C组左侧泪腺注射肉毒杆菌毒素A。比较实验前1d,实验后3、7、14、28、42d的泪液分泌量（SⅠt）、泪膜破裂时间（BUT）、角膜荧光素钠染色评分的变化。42d观察结膜、角膜和泪腺组织病理学改变;通过实时荧光定量PCR对白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和上皮生长因子（EGF）表达量进行检测。结果:实验后第3d开始,B、C组均出现泪液分泌量持续性减少,与A组均有差异（P<0.05）;实验后第7d开始,B、C组均出现BUT持续性缩短以及角膜上皮染色明显增多,与A组比较有差异（P<0.05）;以上临床数据B、C组间比较均无差异（P>0.05）。A组角膜上皮细胞形态正常,B组及C组角膜上皮均存在不同程度表层细胞丝状分离,结膜杯状细胞数目明显减少,C组泪腺组织明显萎缩。B、C组结膜和角膜组织...
【文章来源】：国际眼科杂志. 2020,20(08)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
RT-PCR结果
实验后第42d,处死余下大鼠,分别取左眼结膜及角膜组织,使用动物组织总RNA提取试剂盒提取细胞总RNA,紫外分光光度计检测其纯度和浓度,并进行逆转录获取cDNA。以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)作为内参对照的校准基因(PCR扩增细胞的标志性基因)。引物序列:EGF上游引物为5"-TCGGTGCTGTGCGATTTA-3",下游引物为 5"-TTTCTGGCAGTTCTCCTC-3";IL-6上游引物为5"-CAGTTGCCTTCTTGGGACT-3",下游引物为3"-GCTCTGAATGACTCTGGCTT-5";TNF-α上游引物为5"-CACGTCGTAGCAAACCACCAA-3",下游引物为3"-GTTGGTTGTCTTTGAGATCCAT-5"。采用SYBR green I作为荧光信号对以上指标进行聚合酶链式反应扩增,通过计算2-△△ct值取平均值绘制各指标表达量对比图。PCR反应条件:95℃预变性10min;94℃ 15s、60℃ 1min,40个循环;95℃ 15s、60℃ 1min、95℃ 15s至反应结束。表1 A、B、C组泪液分泌试验酚红棉线长度测量比较 ( x ˉ ±s,mm) 组别 实验前1d 实验后第3d 实验后第7d 实验后第14d 实验后第28d 实验后第42d A组 7.44±0.43 7.34±0.38 7.33±0.27 7.34±0.31 7.30±0.27 7.34±0.30 B组 7.32±0.30 6.12±0.38a,c 4.54±0.45a,c,e 3.83±0.41a,c,e,g 3.83±0.54a,c,e,g 3.52±0.63a,c,e,g C组 7.41±0.35 6.22±0.68a,c 5.38±1.50a,c,e 3.61±0.71a,c,e,g 3.52±0.56a,c,e,g 3.34±0.75a,c,e,g 注:A组:左眼不予任何处理作为空白组;B组:摘除左侧主泪腺;C组:左侧泪腺注射肉毒杆菌毒素A。F组间=383.59,P组间<0.001;F时间=161.50,P时间<0.001;F组间×时间=36.04,P组间×时间<0.001。aP<0.05 vs A组;cP<0.05 vs 本组实验前第1d;eP<0.05 vs 本组实验后第3d;gP<0.05 vs 本组实验后第7d。
HE和PAS染色
【参考文献】：
期刊论文
[1]富血小板血浆（PRP）裂解液在苯扎溴胺诱导的小鼠干眼治疗中的作用[J]. 胡晓琴,张梦瑶,朱佩文,袁晴,黎彪,葛倩敏,梁荣斌,李秋玉,邵毅. 眼科新进展. 2019(11)
[2]Evaluation of a rat meibomian gland dysfunction model induced by closure of meibomian gland orifices[J]. Zi-Yi Dong,Ming Ying,Jie Zheng,Lan-Jun Hu,Jiang-Yan Xie,Yi Ma. International Journal of Ophthalmology. 2018(07)
[3]重组胸腺素β4在干眼模型中对炎症反应的调节作用及对眼表修复的影响[J]. 张慧芹,李颖,冯丽娜,许永根. 中华实验眼科杂志. 2017 (02)
[4]Effect of trapping vascular endothelial growth factor-A in a murine model of dry eye with inflammatory neovascularization[J]. Jin Woo Kwon,Jin A Choi,Eun Young Shin,Tae Yoon La,Dong Hyun Jee,Yeon Woong Chung,Yang Kyung Cho. International Journal of Ophthalmology. 2016(11)
[5]BTX-B诱导大鼠干眼模型的建立及评价标准[J]. 朱海峰,郝兆芹,程钰,高伟. 国际眼科杂志. 2015(09)
[6]摘除主泪腺干眼病鼠泪液功能变化与凋亡相关基因蛋白的表达[J]. 周杨,王传富,姜涛. 中华眼科杂志. 2007 (01)
本文编号：3340037
【文章来源】：国际眼科杂志. 2020,20(08)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
RT-PCR结果
实验后第42d,处死余下大鼠,分别取左眼结膜及角膜组织,使用动物组织总RNA提取试剂盒提取细胞总RNA,紫外分光光度计检测其纯度和浓度,并进行逆转录获取cDNA。以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)作为内参对照的校准基因(PCR扩增细胞的标志性基因)。引物序列:EGF上游引物为5"-TCGGTGCTGTGCGATTTA-3",下游引物为 5"-TTTCTGGCAGTTCTCCTC-3";IL-6上游引物为5"-CAGTTGCCTTCTTGGGACT-3",下游引物为3"-GCTCTGAATGACTCTGGCTT-5";TNF-α上游引物为5"-CACGTCGTAGCAAACCACCAA-3",下游引物为3"-GTTGGTTGTCTTTGAGATCCAT-5"。采用SYBR green I作为荧光信号对以上指标进行聚合酶链式反应扩增,通过计算2-△△ct值取平均值绘制各指标表达量对比图。PCR反应条件:95℃预变性10min;94℃ 15s、60℃ 1min,40个循环;95℃ 15s、60℃ 1min、95℃ 15s至反应结束。表1 A、B、C组泪液分泌试验酚红棉线长度测量比较 ( x ˉ ±s,mm) 组别 实验前1d 实验后第3d 实验后第7d 实验后第14d 实验后第28d 实验后第42d A组 7.44±0.43 7.34±0.38 7.33±0.27 7.34±0.31 7.30±0.27 7.34±0.30 B组 7.32±0.30 6.12±0.38a,c 4.54±0.45a,c,e 3.83±0.41a,c,e,g 3.83±0.54a,c,e,g 3.52±0.63a,c,e,g C组 7.41±0.35 6.22±0.68a,c 5.38±1.50a,c,e 3.61±0.71a,c,e,g 3.52±0.56a,c,e,g 3.34±0.75a,c,e,g 注:A组:左眼不予任何处理作为空白组;B组:摘除左侧主泪腺;C组:左侧泪腺注射肉毒杆菌毒素A。F组间=383.59,P组间<0.001;F时间=161.50,P时间<0.001;F组间×时间=36.04,P组间×时间<0.001。aP<0.05 vs A组;cP<0.05 vs 本组实验前第1d;eP<0.05 vs 本组实验后第3d;gP<0.05 vs 本组实验后第7d。
HE和PAS染色
【参考文献】：
期刊论文
[1]富血小板血浆（PRP）裂解液在苯扎溴胺诱导的小鼠干眼治疗中的作用[J]. 胡晓琴,张梦瑶,朱佩文,袁晴,黎彪,葛倩敏,梁荣斌,李秋玉,邵毅. 眼科新进展. 2019(11)
[2]Evaluation of a rat meibomian gland dysfunction model induced by closure of meibomian gland orifices[J]. Zi-Yi Dong,Ming Ying,Jie Zheng,Lan-Jun Hu,Jiang-Yan Xie,Yi Ma. International Journal of Ophthalmology. 2018(07)
[3]重组胸腺素β4在干眼模型中对炎症反应的调节作用及对眼表修复的影响[J]. 张慧芹,李颖,冯丽娜,许永根. 中华实验眼科杂志. 2017 (02)
[4]Effect of trapping vascular endothelial growth factor-A in a murine model of dry eye with inflammatory neovascularization[J]. Jin Woo Kwon,Jin A Choi,Eun Young Shin,Tae Yoon La,Dong Hyun Jee,Yeon Woong Chung,Yang Kyung Cho. International Journal of Ophthalmology. 2016(11)
[5]BTX-B诱导大鼠干眼模型的建立及评价标准[J]. 朱海峰,郝兆芹,程钰,高伟. 国际眼科杂志. 2015(09)
[6]摘除主泪腺干眼病鼠泪液功能变化与凋亡相关基因蛋白的表达[J]. 周杨,王传富,姜涛. 中华眼科杂志. 2007 (01)
本文编号：3340037
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