弓形虫profilin蛋白的原核表达及其抗体对弓形虫增殖影响

发布时间：2021-08-14 01:03

　　目的:1.建立刚地弓形虫profilin（TgPRF）蛋白的原核表达体系。2.制备兔抗TgPRF多克隆抗体,同时检测其对细胞及速殖子毒性。3.利用小鼠胚胎纤维细胞（BALB/C-3T3）建立弓形虫速殖（RH-green fluorescent protein,RH-GFP）子体外增殖模型,评价TgPRF抗体对弓形虫速殖子体外增殖的抑制作用以及对感染细胞生长及凋亡的影响,为TgPRF疫苗的保护性研究提供理论支撑和实验数据。方法:小鼠腹腔传代获取弓形虫RH株速殖子,提取弓形虫速殖子总RNA并反转录为cDNA,以其为模板通过特异引物进行PCR扩增TgPRF基因。PCR产物及pET-30a（+）载体经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后进行连接,构建pET-30a（+）-TgPRF重组质粒。将pET-30a（+）-TgPRF转化E.coli XL10-GOLD感受态细胞,筛选阳性菌落经PCR及测序鉴定,选取测序正确的质粒转化E.coli BL21-（DE3）表达菌,经IPTG诱导并将表达产物进行SDS-PAGE及Western blotting分析,利用Ni-NTA亲和层析和阴离子柱纯化蛋白后联合佐剂免... 

【文章来源】：遵义医科大学贵州省

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

弓形虫总RNA的凝胶电泳检测Fig.1GelelectrophoresisanalysisoftotalRNAofToxoplasmagondii

形虫 cDNA 等量的水为模板作为任何条带出现（图 2）。图 1 弓形虫总 RNA 的凝胶电泳检测rophoresis analysis of total RNA of To

文 PRF 重组质粒鉴定结果，分别用 TgPRF 特异性引物和通用引物 作做为阴性对照进行 PCR。用 TgPRF 特异粒的通用引物（T7 和 T7t）扩增产物为 68经琼脂糖凝胶电泳可见特异性引物扩增条（泳道 3）亦可见与预期相符条带(图 3)。组质粒样品送公司测序，使用 DNAStar 7比对，结果显示酶切位点正确，基因序列与


本文编号：3341448