USF2与其截短体真核表达载体的构建及对Smurf1/2转录水平的影响

发布时间：2021-08-18 04:37

　　目的构建上游刺激因子2（USF2）及其截短体的真核表达载体,鉴定USF2蛋白中抑制泛素连接酶Smurf1/2转录的功能区域。方法采用PCR技术扩增USF2及其两个截短体USF2（1²35aa）、USF2（236³46aa）编码基因,分别将其构建在pCMV-Myc重组载体上,转染真核细胞后验证其表达,Western blot及实时定量PCR确定USF2下调Smurf1/2转录水平的区域。结果成功地将USF2及其两个截短体编码基因构建至pCMV-Myc载体,并验证其在真核细胞中的正确表达,Western Blot和实时定量PCR实验结果显示,USF2 C端236³46aa区域对Smurf1/2的转录水平有抑制效应。结论 USF2通过其C端236³46aa区域对Smurf1/2的转录产生抑制效应。 

【文章来源】：山东大学学报(医学版). 2013,51(08)北大核心

【文章页数】：4 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 实验细胞及质粒
        1.1.2 主要试剂
    1.2 方法
        1.2.1 引物设计
        1.2.2 M yc-USF2、M yc-USF2 (1~235aa) 、M yc-USF2 (236~346aa) 真核表达载体的构建
        1.2.3 细胞培养及转染
        1.2.4 Western blotting检测
        1.2.5 实时定量PCR
2 结果
    2.1 M yc-USF2、M yc-USF2 (1~235aa) 、M yc-USF2 (236~346aa) 的真核载体构建
    2.2 USF2及其截短体在真核细胞内的表达鉴定
    2.3 USF2及其截短体对Smurf1/2转录水平的影响
3 讨论



本文编号：3349208