沙利度胺对体外培养的人红系细胞γ-珠蛋白基因表达的作用及调控机制的研究

发布时间：2021-08-19 20:47

　　目的:研究沙利度胺对体外定向分化培养的正常人红系细胞γ-珠蛋白基因的诱导作用及调控机制,以进一步了解沙利度胺对红系细胞γ-珠蛋白基因的相关作用。方法:1.采集经粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）动员后的正常人骨髓液10mL,用淋巴细胞分离液密度梯度离心法获得单个核细胞后,再经磁珠分选CD34+造血干祖细胞,接种于本实验室已建立的二阶段体外液体红系定向分化培养体系,促进CD34+造血干祖细胞定向向成熟红细胞方向分化。用倒置显微镜观察培养细胞的基本状态。用Giemsa染色,显微镜下观察细胞形态。诱导分化期间用流式细胞仪定期检测红细胞分化特异性标志物CD235a和CD71的表达情况,以此来确定红系细胞体外培养的顺利进行。2.将终浓度设为50?mol/L、100?mol/L、200?mol/L、300?mol/L的沙利度胺（Thd）为实验组,0?mol/L为阴性对照组（NC）,100?mol/L的羟基脲（HU）为阳性对照组,分别以不同药物浓度作用于红系细胞24h、48h、72h、96h后,采用CCK-8试剂盒检测不同浓度以及不同时间作用条件下红系细胞的存活率;采用实时荧光定量PCR（Real... 

【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

细胞分化第1天、第4天、第7天、第9天、第12天、第15天的显微镜下的细胞形态

亦包括部分中幼红细胞。培养至 8 天及以后，各个不同发育阶段的红系细胞同时出现在同一培养液中，其中以中幼红细胞、晚幼红细胞较多见，随着分化天数的增加，培养液内分化偏晚期的红细胞多见（。见图1-2、图1-3）原始红细胞 早幼红细胞 中幼红细胞 晚幼红细胞 成熟红细胞图 1-2 细胞定向分化过程图，经 Giemsa 染色，1000 倍视野下细胞形态（第 2-15 天）

沙利度胺对体外培养的人红系细胞 γ-珠蛋白基因表达作用及调控机制的研究 2019 届硕士研究生学4）、晚幼红细胞细胞圆形或者椭圆形，核圆，约占整个细胞的 1/2，细胞核者偏位；染色质凝集，浓染呈均匀的块状，没有核仁；胞质量更为呈淡红色。5）、成熟红细胞成熟红细胞呈双凹圆盘状，中心颜色浅染，浅染区约占红细的 1/3。2.流式细胞仪测定细胞 CD34+、CD235a+、CD71+表达情况2.1 磁珠分选后细胞 CD34+的表达情况。见图 1-4

【参考文献】：
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本文编号：3352116