诱导人脐带间充质干细胞向角膜上皮样细胞分化的实验研究

发布时间：2017-04-30 06:08

  本文关键词：诱导人脐带间充质干细胞向角膜上皮样细胞分化的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的研究人脐带间充质干细胞(human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells,hUCMSCs)向角膜上皮样细胞分化的可行性研究。方法1.IV型胶原酶消化法分离培养人脐带间充质干细胞(hUCMSCs),对其进行形态学观察。并通过细胞表型和多潜能诱导分化鉴定hUC-MSCs。2.分别采用胰酶消化法和组织块贴壁法获取兔角膜上皮细胞(corneal epithelial cells RECEs),倒置显微镜观察其形态和生长状态,CCK8法测定RECEs的增殖活性,免疫荧光检测其角膜上皮细胞特异性角蛋白CK3+12的表达。3.将脐带间充质干细胞与兔角膜上皮细胞通过Transwell体系进行隔离共培养7天,诱导过程中倒置显微镜和原子力显微镜对比观察hUC-MSCs形貌的改变;qRT-PCR检测诱导前后人脐带间充质干细胞CK3mRNA,PAX6mRNA表达量的变化;免疫荧光检测角蛋白抗体CK3+12,CK14,CK19,PNCA的表达。设定共培养组为实验组,常规培养hUC-MSCs为对照组。结果HUCMSCs形态比较均一,呈典型的梭形和成纤维形;hUCMSCs高表达间充质干细胞表型CD13、CD29、CD73、CD90,不表达内皮细胞和造血细胞表型CD14、CD31、CD45、HLA-DR;特定的条件培养液下,hUC-MSCs成功向成骨成脂定向分化。RECEs呈类圆形、多边形;增殖快,融合后呈铺路石样外观;CCK8法测定RECEs的生长曲线呈S形;免疫组化检测RECEs表达角膜上皮细胞特异性角蛋白CK3+12。HUC-MSCs与RECEs共培养诱导七天后,倒置显微镜下体积变大,核浆比变小;原子力显微镜下观察hUC-MSCs胞体宽大,胞膜表面立体感减弱;CK3mRNA和PAX6mRNA表达量均比诱导前显著增加(P0.05);免疫荧光检测CK3+12,CK14,CK19,PCNA表达阳性。结论在Transwell共培养体系下,人脐带间充质干细胞可以向角膜上皮样细胞分化。
【关键词】：人脐带间充质干细胞 兔角膜上皮细胞 共培养 诱导
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R329
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 前言7-14
• 参考文献11-14
• 第一部分：人脐带间充质干细胞的分离、培养和鉴定14-25
• 引言14
• 材料与方法14-19
• 结果19-21
• 讨论21-23
• 参考文献23-25
• 第二部分：兔角膜上皮细胞的分离、培养和鉴定25-33
• 引言25
• 材料与方法25-28
• 结果28-30
• 讨论30-32
• 参考文献32-33
• 第三部分 诱导脐带间充质干细胞向角膜上皮样细胞分化的实验研究33-45
• 引言33
• 材料与方法33-38
• 结果38-41
• 讨论41-43
• 参考文献43-45
• 全文总结45-46
• 不足和展望46-47
• 英文缩略词表47-48
• 在校期间发表的论文及科研成果48-49
• 致谢49

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 李华;文峰;漆仲春;周进军;朱亚杰;程朋;魏东;苏晓妹;谭勇;彭晶晶;罗巧丽;李东;张涛;;人脐带间充质干细胞与肝细胞共培养可分化为肝样细胞[J];中国组织工程研究;2013年32期

2 ;In vitro reconstruction and characterization of tissue-engineered human corneal epithelium with seeder cells from an untransfected human corneal epithelial cell line[J];International Journal of Ophthalmology(English Edition);2012年03期

3 任玫卿;栾洁;;兔角膜上皮细胞体外原代培养方法的研究[J];东南大学学报(医学版);2008年02期

4 王智崇,葛坚,黄冰,高前应,刘炳乾,王凌华,喻瓴,范志刚,路晓明,刘敬波;诱导胚胎干细胞向角膜上皮细胞分化的实验研究[J];中国科学C辑:生命科学;2005年02期

  本文关键词：诱导人脐带间充质干细胞向角膜上皮样细胞分化的实验研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：336400