气相色谱-三重四极杆质谱法测定大肠杆菌中有机酸的含量

发布时间：2021-08-27 06:23

　　建立了气相色谱-三重四极杆质谱联用法（GC-MS/MS）同时测定大肠杆菌三羧酸（TCA）循环中6种有机酸的方法。样品经细胞破壁处理、固相萃取（SPE）富集净化,由硅烷化试剂N-（特丁基二甲基硅烷）-N-甲基三氟乙酰胺（MTBSTFA）衍生化后,利用GC-MS/MS多反应监测模式测定,外标法定量。6种有机酸在20～10 000μg/L范围内线性良好,相关系数均大于0.99,加标回收率为82.3%～100.4%,相对标准偏差为2.3%～4.5%,方法检出限为2.0～18μg/L。方法受基质影响小,重现性好,适合于复杂生物基质样本中有机酸含量的测定。 

【文章来源】：化学试剂. 2020,42(04)北大核心

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

6种有机酸衍生物在Scan模式下的总离子流图

6种有机酸衍生物在MRM模式下的离子流图

由于TCA循环代谢是在细胞内进行的,因此需要对胞内代谢物进行提取。分别对比了液氮冻融法、超声破碎法对细胞破碎及代谢物提取的效果,由于液氮冻融的方法,在实验时使细胞处于低温环境,能更好的保护并提取细胞内有机酸,因此在实验过程中以液氮冻融法作为细胞破碎及代谢物提取的方法。为了能够最大程度提取胞内有机酸,随后对液氮冻融法反复冻融的次数进行考查。取同一发酵液经过淬灭、洗涤后分成5批,每批做3个平行样,分别进1、2、3、4、5次液氮冻融破碎处理,然后按1.2.4方法衍生后上机分析,比较不同冻融次数下的代谢物提取量,以液氮冻融一次得到的代谢物有机酸的量作为对照,将经过冻融2、3、4、5次所得到的代谢物的量与前者之比作为纵坐标,结果如图3所示。结果表明,经过4次冻融破碎后,其代谢物释放量基本达到最大值,因此选择液氮冻融法提取4次。2.2.2 大肠杆菌固相萃取条件的优化

【参考文献】：
期刊论文
[1]新型进样瓶-气相色谱质谱法测定烟叶中的24种有机酸[J]. 刘欣,梁梦洁,李银科,王燕梅,米其利,孔维松,许永,李晶.  化学试剂. 2019(05)
[2]气相色谱-质谱联用测定氘标记卤代苯及其衍生物的同位素丰度[J]. 雷雯,侯捷,杜晓宁,张维冰.  化学试剂. 2015(10)
[3]气相色谱-质谱法研究13C标记脂肪酸的同位素丰度和化学纯度[J]. 雷雯,杜晓宁,张维冰.  质谱学报. 2015(05)
[4]基于NMR代谢组学技术对山药化学成分的研究[J]. 张敏,焦宏,郭捷.  食品工程. 2014(04)
[5]固相微萃取结合GC-MS测定食用植物油中的残留有机溶剂[J]. 周雅迪,郝小燕,王道平,梁妍,王颖.  化学试剂. 2014(03)
[6]LC-MS/MS法测定E.coli胞内24种代谢物[J]. 梅辉,戴军,刘文卫,宋鹏飞,吴敬,赵志军.  食品与发酵工业. 2011(05)
[7]液质联用法测定广山楂有机酸含量[J]. 王乃平,袁艳,江海燕,李阳杰.  中国实验方剂学杂志. 2011(10)
[8]代谢组学及其在药理学中的进展[J]. 何君,周宏灏.  中国药理学通报. 2006(11)



本文编号：3365834