不同周龄C57BL/6小鼠膝骨关节炎运动模型构建研究
发布时间：2021-08-31 01:12
研究目的膝骨关节炎是一种包括遗传、代谢、发育、应力失衡、创伤、内分泌等生物性和机械性因素相互作用,最终导致膝关节软骨变性、软骨下骨硬化、软骨下骨囊肿和骨赘形成的慢性、进行性骨关节病。相关数据表明其发病率呈逐年上升趋势,并趋于年轻化。适宜的运动可以改善膝骨关节炎的发生发展,但高强度运动则可以造成小鼠创伤性膝关节炎。近年来,创伤性膝骨关节炎处于高发状态,对其机制的研究,病情的防治备受人们瞩目。其中理想的造模方式对其复杂的发病机制研究起着至关重要的作用,因此,本实验设计将分别对8周和16周小鼠进行跑台运动和半月板失稳术（destabilization of the medial meniscus,DMM）手术建立创伤性膝骨关节炎模型,并对其效果进行比较,为后续进行的作用机制和运动康复作用的探讨提供可行的、高效的、可重复的、易操作、贴近实际的动物造模方式。研究方法8周龄,20周龄雄性C57BL/6小鼠各32只,两种不同周龄小鼠各分别随机分为对照组（n=8）,手术组（n=8）,假手术组（n=8）,运动组（n=8）。对照组不施加任何干预,常规饲养;手术组对小鼠双侧膝关节进行DMM手术;假手术组小鼠...
【文章来源】：上海体育学院上海市
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
运动对小鼠体重的影响（A：8周龄小鼠体重的变化，B：20周龄小鼠体重变化，NOR：空白对照组，DMM：DMM手术组，SHAM：假手术组，RUN：跑台组
图2.不同造模方式对不同周龄小鼠膝关节软骨结构和软骨细胞的影响（n=8，A：8周龄和20周龄小鼠膝关节HE染色图，X100；B：小鼠膝关节HE染色关节软骨面Mankin's 评分*P<0.05, **P<0.01,RUN vsNOR ,DMM vs SHAM;#P<0.05,RUN vs DMM. C：小鼠膝关节HE染色关节软骨细胞Mankin's 评分，###P<0.001,RUN vs DMM. 处表示软骨损伤）3.3 跑台和DMM手术造成小鼠膝关节软骨钙化关节软骨放射层与钙化软骨之间有一种特殊的染色线，称之为潮线，通过番红固绿染色和OARSI评分可以明显地观察到潮线是够完整，软骨是否出现钙化，且能够判断是否有血管从软骨下骨穿过钙化软骨到达潮线并作出比较。番红主要染软骨组织为红色，固绿主要染骨组织为浅绿色。如图3所示，与正常组相比，跑台运动造成潮线破坏，软骨钙化现象（图A-1,2,5,6）；与SHAM组相比，DMM手术也出现潮线破坏，软骨钙化的现象，且DMM组较RUN组更为严重（图A-3，4，7，8）。且有显著性差异（图B）。RUN vs NOR, DMM vs SHAM *P<0.05，**P<0.01，***P<0.001 ；RUN vs DMM,#P<0.05,##P<0.01.
图3.不同造模方式对不同周龄小鼠膝关节软骨钙化的影响（n=8，A：各组小鼠膝关节番红固绿染色图，X100.B：各组小鼠OARSI评分。(*P<0.05, **P<0.01 RUN vs NOR, DMM vs SHAM;#P<0.05, ##P<0.01 DMM vs RUN， 处表示软骨钙化）3.4 跑台训练和DMM手术影响小鼠膝关节软骨炎症因子mRNA表达小鼠跑台运动干预结束后，提取各组小鼠右膝关节，去除附着的肌肉韧带组织，摘取各组膝关节软骨提取总RNA，运用荧光定量PCR检测小鼠右膝关节软骨中促炎性细胞因子TNF-α,IL-6,MMP9和二型胶原纤维的mRNA水平。结果如图4所示，DMM手术和跑台干预加剧了关节软骨中二型胶原纤维的损伤，20周龄小鼠Collagen2 mRNA的水平较8周龄低但无显著性差异(图4-A）；促炎性细胞因子TNF-αmRNA水平，跑台运动较正常组，DMM手术较SHAM组均出现显著上调，且有显著性差异（图4-B）；促炎性细胞因子MMP9mRNA水平，跑台运动较正常组，DMM手术较SHAM组均出现显著上调，并且8周龄组的小鼠，RUN组与DMM组相比明显升高，均有显著性差异（图4-C）；促炎性细胞因子IL-6mRNA水平，跑台运动相较正常组，DMM手术相较于SHAM组均出现显著上调，并且8周龄和20周龄小鼠RUN组较DMM组明显升高，均有显著性差异（图4-D）。RUN vs NOR, DMM vs SHAM ,*P<0.05,**P<0.01，
本文编号：3373874
【文章来源】：上海体育学院上海市
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
运动对小鼠体重的影响（A：8周龄小鼠体重的变化，B：20周龄小鼠体重变化，NOR：空白对照组，DMM：DMM手术组，SHAM：假手术组，RUN：跑台组
图2.不同造模方式对不同周龄小鼠膝关节软骨结构和软骨细胞的影响（n=8，A：8周龄和20周龄小鼠膝关节HE染色图，X100；B：小鼠膝关节HE染色关节软骨面Mankin's 评分*P<0.05, **P<0.01,RUN vsNOR ,DMM vs SHAM;#P<0.05,RUN vs DMM. C：小鼠膝关节HE染色关节软骨细胞Mankin's 评分，###P<0.001,RUN vs DMM. 处表示软骨损伤）3.3 跑台和DMM手术造成小鼠膝关节软骨钙化关节软骨放射层与钙化软骨之间有一种特殊的染色线，称之为潮线，通过番红固绿染色和OARSI评分可以明显地观察到潮线是够完整，软骨是否出现钙化，且能够判断是否有血管从软骨下骨穿过钙化软骨到达潮线并作出比较。番红主要染软骨组织为红色，固绿主要染骨组织为浅绿色。如图3所示，与正常组相比，跑台运动造成潮线破坏，软骨钙化现象（图A-1,2,5,6）；与SHAM组相比，DMM手术也出现潮线破坏，软骨钙化的现象，且DMM组较RUN组更为严重（图A-3，4，7，8）。且有显著性差异（图B）。RUN vs NOR, DMM vs SHAM *P<0.05，**P<0.01，***P<0.001 ；RUN vs DMM,#P<0.05,##P<0.01.
图3.不同造模方式对不同周龄小鼠膝关节软骨钙化的影响（n=8，A：各组小鼠膝关节番红固绿染色图，X100.B：各组小鼠OARSI评分。(*P<0.05, **P<0.01 RUN vs NOR, DMM vs SHAM;#P<0.05, ##P<0.01 DMM vs RUN， 处表示软骨钙化）3.4 跑台训练和DMM手术影响小鼠膝关节软骨炎症因子mRNA表达小鼠跑台运动干预结束后，提取各组小鼠右膝关节，去除附着的肌肉韧带组织，摘取各组膝关节软骨提取总RNA，运用荧光定量PCR检测小鼠右膝关节软骨中促炎性细胞因子TNF-α,IL-6,MMP9和二型胶原纤维的mRNA水平。结果如图4所示，DMM手术和跑台干预加剧了关节软骨中二型胶原纤维的损伤，20周龄小鼠Collagen2 mRNA的水平较8周龄低但无显著性差异(图4-A）；促炎性细胞因子TNF-αmRNA水平，跑台运动较正常组，DMM手术较SHAM组均出现显著上调，且有显著性差异（图4-B）；促炎性细胞因子MMP9mRNA水平，跑台运动较正常组，DMM手术较SHAM组均出现显著上调，并且8周龄组的小鼠，RUN组与DMM组相比明显升高，均有显著性差异（图4-C）；促炎性细胞因子IL-6mRNA水平，跑台运动相较正常组，DMM手术相较于SHAM组均出现显著上调，并且8周龄和20周龄小鼠RUN组较DMM组明显升高，均有显著性差异（图4-D）。RUN vs NOR, DMM vs SHAM ,*P<0.05,**P<0.01，
本文编号：3373874
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