无抗性标记自主发光鲍曼不动杆菌的构建及怡莱霉素E的药效学研究

发布时间：2021-09-02 15:15

　　鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii,Ab）属于革兰氏阴性菌,是引起医院感染的重要病原菌。近年来耐药Ab出现的比率不断上升,公众对此产生关注。本研究首次将Tn7转座子与dif序列结合,一步法成功构建出一种无抗性标记的自主发光鲍曼不动杆菌（unmarked autoluminescent Ab,UAlAb）,其基因组中含有能表达自主发光蛋白的基因luxCDABE,不需添加任何外源底物就可以自主发光,在黑暗条件下通过肉眼就能观察到发光。传统切除抗性标记的位点特异性重组方法都需要人工额外表达外源解离酶或者转座酶,Ab本身在增殖过程中会产生Xer解离酶,该酶可以识别dif序列从而切除序列之间的抗性基因,无需额外表达外源蛋白,操作简单方便,省去了中间很多不必要的麻烦。Xer重组系统用于切除抗性基因近几年才被报道,且大多用于分枝杆菌属的遗传操作,尚未见任何报道将其应用于Ab。本研究结果表明,构建的UAlAb其生理状态与亲本Ab（parent Ab,pt-Ab）相近,插入的基因对其生长不产生显著影响,可以通过检测相对发光单位（relative light units,RLUs... 

【文章来源】：中国科学技术大学安徽省 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．３不同菌株中／？．ｖ基因的结构??（来源?Ｅｄｗａｒｄ?Ａ．?Ｍｅｉｇｈｅｎ．Ｍ／ｃ／ｒ？６７〇／０ｇ／ｃｆｌ／ｉ＾ｖｚｅｖｕｓ．?１９９１，ｐｌ２３－１４２．）??

图１．４?Ｔｎ７的结构１６４１??

（来源于?Ｐｕｂｌｉｃ?Ｈｅａｌｔｈ?Ｉｍａｇｅ?Ｌｉｂｒａｒｙ）??１．５．３结核分枝杆菌的致病机理??Ｍｔｂ通常感染人的肺部，当ＴＢ患者咳嗽、打喷嚏、说话或吐痰时，含有Ｍｔ的唾液飞沫就会通过空气传播，被周围的人吸入，这些含有Ｍｔｂ的细小液滴主通过呼吸道进入人体。感染Ｍｔｂ并最终形成肺结核取决于以下四个连续的过程：??１）?Ｍｔｂ的吞噬作用２）?Ｍｔｂ的细胞内增殖３）潜伏的感染阶段４）活跃的肺部染。这些过程分别对应着不同的临床状况：自发治愈，疾病，潜伏感染以及再活或再感染［９５］。免疫能力受损的个体一旦感染Ｍｔｂ就很容易患上活动性ＴＢ，其是艾滋病患者。然而，没有涉及人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）?／ＴＢ共感染个体临床状况需要视具体情况而定。通常情况下，Ｍｔｂ侵染机体后会被机体的免疫统大量清除，但其可以通过免疫逃逸的方式在机体中存活。Ｍｔｂ通过抑制溶酶与吞噬体融合的方式进行逃逸。吞噔的Ｍｔｂ分泌的丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（ＰｋｎＧ）直接抑制吞噬体与溶酶体的融合，同时，对核转录因子（ＮＦ－ｋＢ）的制也会间接降低这种融合［９６］。作为吞噬体表面的重要组分，３－磷酸磷脂酰肌

【参考文献】：
期刊论文
[1]Antimicrobial resistance in Acinetobacter baumannii : From bench to bedside[J]. Ming-Feng Lin,Chung-Yu Lan.  World Journal of Clinical Cases. 2014(12)

博士论文
[1]多重耐药鲍曼不动杆菌基因组与“耐药岛”的比较基因组学研究[D]. 许攀峰.浙江大学 2012



本文编号：3379242