小鼠几种长链非编码RNA基因功能的初步研究

发布时间：2017-05-01 05:05

  本文关键词：小鼠几种长链非编码RNA基因功能的初步研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：越来越多的研究表明,基因突变或修饰是人类疾病的重要病因之一。最新的研究表明,人类基因组中约93%的序列可以被转录,转录组中98%基因序列的是不编码蛋白质的非编码RNA (noncoding RNA, ncRNA),而具有蛋白质编码功能的转录序列不超过2%。非编码RNA包括小ncRNAs和lnc RNAs(long non-coding RNAs).现有的研究表明lncRNAs在表观遗传,转录水平、转录后水平方面控制基因的表达和维持干细胞干性、信号转导、细胞增殖和分化、代谢、个体发育等几乎所有关键生命活动中发挥重要的调控作用,并且与人类多种重大疾病的发生密切相关,如癌症发生、呼吸道疾病、心血管疾病、神经退行性疾病、病毒感染。但是,至今已知功能的lncRNA寥寥无几,这就成为了ncRNA功能作用研究的重大障碍。本论文首先从NCBI中通过QPCR筛选在出生后小鼠骨骼肌中表达异常的相关2个基因,AK006720和AK037838,和在出生后雌性小鼠卵巢中表达异常的1个基因,NONMMUG005147.构建这三个基因的过表达载体,针对骨骼肌发育的CMV启动的AK006720和AK037838的过表达载体通过转染成肌细胞C2C12,验证其在C2C12细胞表达量,以及对骨骼肌发育关键调控因子MyoG、MyoD、Myf5、Myf6和MEF2c的影响。构建组织特异性ZP3启动的NONMMUG005147特异性过表达载体,制作转基因小鼠,以验证其出生后动物水平的基因功能。结果表明：长链非编码RNA基因AK006720和AK037838分别在出生后小鼠在骨骼肌中第5天比0天表达量显著升高3-4倍(p0.05)；长链非编码RNARNA-NONMMUT005147在成年雌性小鼠卵巢中相对其它组织(心,肝,脾,脑,骨骼肌)显著高表达(p0.05),在雌性小鼠出生后3周要比出生2天或5周的在卵巢中表达量显著升高(p0.05)。然而,AK006720和AK037838对C2C12细胞中对细胞分化和相应骨骼肌发育因子的表达没有明显影响(p0.05)。针对NONMMUG005147基因在3周龄小鼠卵巢中呈现高表达潜能,成功制作新生小鼠3只,但是出生时即被母鼠咬死。通过PCR证明新生小鼠1/3携带转基因,但在小鼠中是否过表达该基因过表达及对卵巢发育的影响,尚需进一步研究。
【关键词】：长链非编码RNA 小鼠 骨骼肌 卵巢 发育
【学位授予单位】：昆明理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：Q78;R3416
【目录】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-12
• 缩略词12-13
• 第一章 绪论13-20
• 1.1 引言13
• 1.2 骨骼肌生长发育的分子机制13-14
• 1.3 非编码RNA基因与骨骼肌及卵巢发育机制的研究14-18
• 1.3.1 MicroRNA对骨骼肌生长发育的研究15
• 1.3.2 LncRNA对骨骼肌生长发育的研究15-17
• 1.3.2.1 LncRNA在骨骼肌中作用形式16
• 1.3.2.2 LncRNAs在成肌细胞分化中的作用16-17
• 1.3.3 卵巢发育的调控的研究17-18
• 1.4 本论文研究的目的及意义18-20
• 第二章 小鼠几种长链非编码RNA筛选与细胞水平基因功能的验证20-52
• 2.1 引言20
• 2.2 实验材料与方法20-42
• 2.2.1 实验动物20
• 2.2.2 实验试剂20-22
• 2.2.3 主要试剂配制方法22-25
• 2.2.4 主要仪器25-26
• 2.2.5 实验设计26-42
• 2.2.5.1 实验一：肌肉相关长链非编码RNA与卵巢发育相关长链非编码RNA的筛选26-30
• 2.2.5.2 实验二：AK006720,AK037838及NONMMUG005147过表达载体的构建30-39
• 2.2.5.3 实验三：AK006720,AK037838在C2C12细胞水平功能验证39-42
• 2.2.6 统计分析42
• 2.3 实验结果42-50
• 2.3.1 实验一：肌肉相关长链非编码RNA与卵巢发育相关长链非编码RNA的筛选42-45
• 2.3.2 实验二：AK006720,AK037838及NONMMUG005147过表达载体的构建45-46
• 2.3.3 实验三：AK006720和AK037838在C2C12细胞功能验证46-50
• 2.4 讨论50-52
• 第三章 非编码RNA转基因小鼠的初步研究52-68
• 3.1 引言52
• 3.2 材料与方法52-63
• 3.2.1 实验动物52
• 3.2.2 实验试剂52-53
• 3.2.3 主要试剂的配制53
• 3.2.4 主要仪器与设备53-54
• 3.2.5 自制辅助设备54
• 3.2.6 显微操作针的制备54
• 3.2.7 超数排卵54-55
• 3.2.8 受精卵获取55-56
• 3.2.9 显微注射56-60
• 3.2.9.1 注射用DNA的准备56-58
• 3.2.9.2 显微操作58-60
• 3.2.10 胚胎培养60
• 3.2.11 胚胎移植60-62
• 3.2.11.1 ICR公鼠结扎60-61
• 3.2.11.2 假孕处理61
• 3.2.11.3 胚胎移植61-62
• 3.2.12 转非编码RNA基因小鼠鉴定62-63
• 3.2.12.1 转基因小鼠鉴定引物的设计62
• 3.2.12.2 PCR反应及电泳62-63
• 3.3 实验结果63-66
• 3.3.1 EGFP载体胚胎发育63-65
• 3.3.2 非编码RNA(ZP3-NONMMUG005147)转基因小鼠产生65-66
• 3.4 讨论66-68
• 第四章 结论68-69
• 致谢69-71
• 参考文献71-78
• 附录A 攻读硕士期间发表论文目录78

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 赵晓;莫德林;张悦;龚雯;李安宁;陈瑶生;;猪的骨骼肌生长发育研究进展[J];生命科学;2011年01期

  本文关键词：小鼠几种长链非编码RNA基因功能的初步研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：338255