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小鼠抗人ABHD16A多克隆抗体制备

发布时间:2021-10-20 22:36
  克隆并原核表达人含α/β水解酶结构域丝氨酸酶16A(ABHD16A)基因,制备小鼠抗ABHD16A多克隆抗体。采用反转录PCR克隆ABHD16A的cDNA序列,对该序列进行同源性分析,将克隆的ABHD16A cDNA序列克隆至原核表达载体pET-28a(+)导入E.coli BL21(DE3)进行原核表达,将纯化ABHD16A的重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗血清。研究结果显示,人ABHD16A cDNA序列长度为1 677 bp,序列高度保守,并具有保守的脂肪酶样基序和相应的功能区,原核表达的重组ABHD16A蛋白免疫小鼠后制备的多克隆抗血清在1∶5 000的稀释度具有较好的抗原抗体结合活性。成功制备了小鼠抗人ABHD16A多克隆抗体。 

【文章来源】:河南农业大学学报. 2020,54(02)北大核心CSCD

【文章页数】:7 页

【文章目录】:
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 人肝癌HepG2细胞的培养
        1.2.2 hABHD16A
        1.2.3 重组hABHD16A的原核表达
        1.2.4 重组hABHD16A包涵体的纯化
        1.2.5 免疫原制备与动物免疫
        1.2.6 hABHD16A多克隆抗血清的制备、效价测定
        1.2.7 Western blot法检测HepG2细胞与抗hABHD16A抗体结合情况
2 结果与分析
    2.1 hABHD16A cDNA的PCR扩增与重组pMD19-T-hABHD16A的构建
    2.2 ABHD16A序列分析
    2.3 pET28a-hABHD16A表达载体构建
    2.4 重组hABHD16A的诱导表达与纯化
    2.5 多克隆抗血清的制备与效价测定
    2.6 抗体结合活性检测
3 讨论


【参考文献】:
期刊论文
[1]应用短肽阵列筛选哮喘患儿血清粉尘螨变应原特异性IgE抗体的结合表位[J]. 滕飞翔,孙金霞,王楠,俞黎黎,崔玉宝.  细胞与分子免疫学杂志. 2017(08)
[2]抗糖尿病小分子ABHD6抑制剂的研究进展[J]. 司良辉,马惠,周金培,张惠斌.  中国药科大学学报. 2017(02)
[3]兔抗小鼠含SET结构域(赖氨酸甲基转移酶)8(Setd8)多克隆抗体制备和应用[J]. 马海涛,郭佳倩,夏静,牛长敏,申雪沂,孙红亚,郑英.  细胞与分子免疫学杂志. 2017(02)
[4]大肠杆菌表达系统和酵母表达系统的研究进展[J]. 祁浩,刘新利.  安徽农业科学. 2016(17)
[5]ABHD2基因与慢性阻塞性肺疾病关系的研究进展[J]. 赵婷婷,强丽霞,李香顺,吕娜,金寿德.  现代生物医学进展. 2016(11)
[6]Abhd2基因与肺气肿发病机制研究[J]. 梁蕊,金寿德,张新,刘立杰,荣海芳.  现代生物医学进展. 2011(23)

博士论文
[1]脂代谢相关基因ABHD5在结肠癌发生发展及耐药中的作用及机制研究[D]. 彭媛.第三军医大学 2017

硕士论文
[1]FLW牛CPT2、ABHD5、ACSL1基因单核苷酸多态性与生产性状的关联分析[D]. 刘小婷.山西农业大学 2016



本文编号:3447715

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