柯萨奇病毒A5病毒样颗粒的制备、纯化和鉴定

发布时间：2021-10-21 23:43

　　目的构建柯萨奇病毒A5（coxsackievirus A5, CV-A5）病毒样颗粒（virus-like particles, VLPs）,并对其进行纯化和鉴定。方法①将CV-A5 P1和3CD基因序列根据昆虫细胞密码子偏好性,对CV-A5-3487R4/CHN XY/2017株基因进行优化并合成,然后分别克隆至供体质粒pFastBacDual的多角体蛋白启动子（polyhedrin promotor, pPh）和pPl0启动子后,构建pFastBacDual-Pl/3CD重组质粒;②重组质粒转化到大肠杆菌（Escherichia coli,）DH10 Bac^TM中,转座形成重组杆状病毒质粒（baculovirus plasmid, bacmid）;③再将重组bacmid转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒并表达CV-A5结构蛋白、组装VLPs。应用限制性酶切、PCR扩增、免疫荧光（immuno-fluorescence assay, IFA）技术对CV-A5 VLPs的蛋白进行鉴定;④再利用蔗糖垫底离心和氯化铯（CsCl）密度梯度离心的方法纯化CV-A5 VLPs... 

【文章来源】：微生物学免疫学进展. 2020,48(03)

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

纯化rCV-A5VLs电镜观察

重组质粒pFastBacDual-P1/3CD 分别经EcoRⅠ/XbalⅠ和XhoⅠ/NheⅠ双酶切后,琼脂糖凝胶电泳的条带分别在2 500 bp和1 900 bp左右,与合成的CV-A5 P1和CV-A5 3CD片段预期大小一致,见图1。2.1.2 PCR鉴定

pFastBacDual-P1/3CD 重组Bacmid DNA鉴定图

【参考文献】：
期刊论文
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[2]2014—2016年孝感地区手足口病流行病学及柯萨奇病毒A6和A5型基因特征[J]. 丁穗,李从荣,王远虹,骆胜超,喻珂,张平.  职业与健康. 2018(08)
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本文编号：3449950